沉默Mi-eft2基因在黄灯笼辣椒根结线虫防治中的作用研究

根结线虫病是制约海南特色经济作物黄灯笼辣椒产业发展的因素之一，化学防治作为目前主要的防治方法会对黄灯笼辣椒的品质和环境造成一定的污染，因此，利用RNA干扰技术使寄主植物直接抑制线虫生命周期必需基因的表达，降低其病害能力，是环保、可持续发展的新方法之一。本项目拟针对已克隆到的南方根结线虫(Meloidogyne incognita)生命周期必需基因-延长因子2基因(elongation factor 2,Mi-eft2)，构建沉默该基因的转基因黄灯笼辣椒来降低线虫的危害能力，对黄灯笼辣椒根结线虫防治的分子育种作一定的探索研究，为获得更多防治根结线虫的抗性育种新基因新材料的研究提供一种可借鉴的理论实践基础，同时也为海南的黄灯笼辣椒产业的发展贡献力量。

利用 RNA 干扰技术使寄主植物直接抑制线虫生命周期必需基因的表达，降低其病害能力，是环保、可持续发展的新方法之一。本项目针对已克隆到的南方根结线虫(Meloidogyne incognita) 生命周期必需基因-延长因子 2 基因 (elongation factor 2, Mi-eft2)，完成了靶基因 dsRNA 的模版片段的筛选、克隆及体外合成了 dsRNA；进行了南方根结线虫2龄幼虫的靶基因 RNA 干扰实验，检测了靶基因沉默效果；干扰处理后的线虫与寄主植物番茄共培养后发现，靶基因表达量受到沉默程度越大的，线虫侵染寄主的能力与对照相比就越降低，这个已获得的该基因的部分功能遗传学信息，证明了靶基因 Mi-eft2 对线虫的侵染能力很重要，暗示该基因有作为抗线虫植物培育的新候选基因资源的潜质，利用 RNAi 技术干扰该基因的表达有利于南方根结线虫的防控；确定了 1 个用于构建植物表达干扰载体的 dsRNA 片段并构建了相关过表达和根部特异表达干扰载体；在继续研究如何建立黄灯笼辣椒的农杆菌侵染后的再生体系的同时，选择了番茄作为转化体系来研究转基因寄主拮抗线虫的效果，并获得了部分目标载体（pBI121、pBI-RNAi）转化番茄的阳性植株，为本项目以获得更多防治根结线虫的抗性育种新材料为目的的研究了提供基础。