干预NF-κB活化对脑出血后不同时期炎症反应和细胞凋亡的影响

Unlike the primary damage after intracerebral hemorrhage (ICH), which is inevitable in most cases, the secondary damage happens in a period of time after ICH and interference measures can be taken on to improve the prognosis. According to the results of our previous research and related reference, apoptosis and prognosis are closely related to the NF-κB activation. It is still questionable, however, whether NF-κB activation directly leads to poor functional outcome or it is just a compensatory mechanism to protect the brain tissue from damage. Based on the overseas and domestic research, we propose that NF-κB has a dual role that promotes inflammatory response in the early stage and is neuroprotective in the late stage after ICH. To verify the above assumptions, we plan to produce ICH model in vivo and vitro, interfere NF-κB activation with drugs, overexpression and RNAi technology, detect the NF-κB activation, related inflammatory factors, apoptosis and related factors, and explore the effects of NF-κB activation on inflammatory response, apoptosis at different stages after ICH. We hope, based on the results of these researches, different intervention strategies can be applied at different stages after ICH to relieve the inflammatory response, reduce the apoptotic cells and then improve the prognosis.

脑出血（ICH）后的原发性损害常无法避免，而继发性损害在ICH后一段时间内发生，可对其干预来改善预后。申请人研究结果和相关文献表明，血肿周围脑组织中NF-κB活化与细胞死亡和预后关系密切，但NF-κB活化促进细胞凋亡，还是其在细胞凋亡后表达增高以保护神经细胞目前尚无定论。结合国内外相关研究，我们设想NF-κB在ICH后存在早期促进炎症反应及细胞凋亡和晚期减轻炎症反应和细胞凋亡的双向作用。为验证该设想，我们拟制作脑出血体内和体外模型，在ICH后的不同时期，分别应用NF-κB激活和抑制药物、基因过表达、RNAi技术来干预NF-κB活化，检测NF-κB活化及各亚基表达、相关炎性因子表达、细胞凋亡及相关因子表达，探究NF-κB在ICH后不同时期对炎症反应、细胞凋亡的具体作用机制，为今后在ICH后不同时期针对NF-κB采取不同的干预策略，进而减轻炎症反应，减少细胞凋亡，改善患者预后提供新的理论依据。

研究背景：脑出血（ICH）后的继发性损害可对其干预来改善预后。文献表明，血肿周围脑组织中NF-κB活化与细胞死亡和预后关系密切，但NF-κB活化促进细胞凋亡，还是在细胞凋亡后表达增高以保护神经细胞目前尚无定论。本课题中，我们制作脑出血体内模型，在ICH后不同时期，分别应用NF-κB激活和抑制剂来干预NF-κB活化，检测NF-κB活化及各亚基表达、相关炎性因子表达、细胞凋亡及相关因子表达，探究NF-κB在ICH后不同时期的作用机制。.主要研究内容及关键数据：本课题实验中，成功制作大鼠脑出血体内实验模型，在出血后6h、12h、1d、2d、4d、7d、10d和14d取血肿周围脑组织，结果发现，NF-κB的活化存在2d和10d两个峰值，其亚基p50和p65表达高峰分别为1d和2d，导致了NF-κB的活化的第一高峰，亚基c-Rel表达高峰为10d，导致了NF-κB的活化的第二高峰。在NF-κB的活化的第一高峰，凋亡因子caspase-3和细胞凋亡达到高峰，而抑制凋亡因子bcl-2达到谷值；在NF-κB的活化的第二高峰，caspase-3和细胞凋亡下降，而bcl-2恢复至正常水平。.在干预实验中，通过在早期和晚期分别抑制NF-κB活化的方法测定前述各指标的变化。在0d、1d、2d分别枕大池注入NF-κB抑制剂TAT-NBD作为早期抑制组，在6d、7d、8d分别枕大池注入TAT-NBD作为晚期抑制组，结果发现，NF-κB活化的两个高峰分别受到抑制，早期抑制组NF-κB活化的第一高峰和p65的表达受抑制，同时细胞凋亡和caspase-3表达水平降低，bcl-2降低水平较前减弱；晚期抑制组NF-κB活化的第二高峰和c-Rel的表达受抑制，同时细胞凋亡和caspase-3表达水平升高。而在0d、1d、2d分别枕大池注入TAT-NBD，且在6d、7d、8d分别枕大池注入NF-κB激活剂佛波醇酯（PMA），结果发现，NF-κB活化的第一高峰和p65的表达受抑制，同时细胞凋亡和caspase-3表达水平降低，bcl-2降低水平较前减弱； NF-κB活化的第二高峰和c-Rel的表达增强，同时细胞凋亡和caspase-3表达水平明显降低。.科学意义：通过以上结果可以推断，为减轻炎症反应和减少细胞凋亡，可以在ICH后的不同时期采取的不同的NF-κB活化干扰策略，对今后ICH的治疗提供了理论依据。