雌激素促进子宫内膜癌细胞增殖生长相关的信号传导通路调控机制研究

在广西科技基金项目研究中发现雌激素通过AKT信号通路诱导子宫内膜癌细胞产生VEGF、bFGF和IL-8因子。但雌激素介导的细胞增殖及信号通路异常的机理尚未清楚。本研究通过体外实验验证内膜癌细胞在雌激素作用下产生VEGF、bFGF、IL-8因子对其细胞的生物学功能影响。采用Real-PCR和Western blot技术对内膜癌细胞分别在雌激素、VEGF、bFGF、IL-8作用,MAPK通路、PI3K/Akt通路重要表达基因蛋白的表达情况。分别对MAPK通路、PI3K/Akt通路重要表达基因沉默(siRNA)，介导及相应受体封闭情况下对内膜癌细胞的VEGF、bFGF、IL-8基因蛋白表达、对细胞生物学功能的影响、对细胞在裸鼠成瘤的影响。利用iTRAQ标记的定量蛋白质组学筛选鉴定雌激素促进内膜癌细胞增殖相关的潜在通路调控机制，阐述雌激素与内膜癌细胞增殖相关的信号通路的相互关系和可能机制。

子宫内膜癌是一种女性生殖系统常见的恶性肿瘤，目前认为子宫内膜癌的发生可能与无拮抗的雌激素长期作用有关，但雌激素如何调节细胞增殖及信号通路异常的机理尚未清楚。通过：.1）荧光定量PCR、ELISA检测雌二醇 、雌激素受体抑制剂(ER组)、AKT抑制剂分别作用内膜癌细胞后，VEGF、bFGF、IL-8基因mRNA及蛋白的表达；qRT-PCR、Western Blot技术检测雌二醇作用内膜癌细胞后AKT活化情况，以及AKT抑制剂、ER抑制剂对AKT活化的影响，TransAM检测不同浓度雌二醇及其作用不同时间后的NF-κB活性变化；细胞集落形成实验、流式细胞仪检测细胞周期的变化，CFSE法检测细胞增殖能力。结果显示，雌二醇可能经AKT激活NF-κB通路产生VEGF、bFG因子，促进肿瘤细胞的增殖与迁移能力。.2）RT-PCR及Western blot分别检测VEGF、bFGF、VEGFR受体抑制剂BIBF1120、FGFR受体抑剂Ponatinib和特异性MAPK通路阻断剂U0126、PI3K/AKT抑制剂LY294002分别作用内膜癌细胞后，MEK1、ERK1/2 、AKT、PI3K mRNA及蛋白的表达；MTT检测细胞增殖，流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期及凋亡，体外穿膜实验检测各组细胞的迁移能力，结果显示，雌二醇通过非基因转录效应产生的VEGF、bFGF可以激活MAPK、PI3K/AKT通路，促进子宫内膜癌的发生、发展。.3）分别对MAPK通路、PI3K/Akt通路重要表达基因沉默(siRNA)，体外实验及动物实验进一步检证，MAPK、PI3K基因低表达可以干扰E2 在基因、蛋白水平激活子宫内膜癌细胞产生VEGF、bFGF，可以下调E2 对子宫内膜癌细胞增殖的促进作用和凋亡机制作用，提示MAPK、PI3K基因可能成为子宫内膜癌分子治疗的潜在靶点。.4）利用iTRAQ标记的定量蛋白质组学筛选鉴定雌激素促进内膜癌细胞增殖相关的差异蛋白NCBP1、EIF3B、KS6A1、STMN1、HSBP1等可能是子宫内膜癌的潜在生物标志物，联合检测这些蛋白可能会提高内膜癌诊断的特异性和敏感性。.本研究阐述了雌激素与内膜癌细胞增殖相关的信号通路的相互关系的可能机制，为子宫内膜癌预防和靶向治疗提供理论依据。