MiR-200c表达与非小细胞肺癌放射敏感性的关系及相关机制研究

miRNAs have been investigated intensively to be novel biomarkers for prognosis and chemosensitivity of cancer. However, little is known about the role of miRNA in regulating radiotherapy sensitivity ofcancer. Our previous studies have shown for the first time that the level of plasma miR-200c is associated with clinical outcome in locally advanced NSCLC patients treated with radiotherapy of which the mechanistic basis is not yet known.Further studies are warranted to address the mechanism underlying the contribution of miR-200c to the response of NSCLC to radiotherapy. Thus, we postulate that miR-200c might induce radiosensitiviy of NSCLC via inhibiting epithelial -mesenchymal transition(EMT).To validate the hypothesis ,we will use real time PCR, Western-blot, miRNA transfection/knockdown techniques and MTT assay to identify the involvement of miR-200c in modulating NSCLC radiosensitivity in multilevel models. Moreover, the molecular mechanism of miR-200c playing its role by blocking EMT will be further elucidated. The present study could uncover the underlying mechanism regarding varying response of NSCLC to radiotherapy and open avenues for developing a novel biomarker for predicting radiotherapy efficacy and guiding individualized radiation therapy.

微小RNA(miRNA)作为肿瘤预后和化疗疗效标志物是近年研究热点之一，但对miRNA与放疗敏感性的关系鲜有报道。我们的前期研究首次发现：局部晚期NSCLC患者血浆miR-200c水平与放疗疗效密切相关，其影响NSCLC放疗敏感性的作用机制有待探索。为此我们提出假说：miR-200c可能通过抑制上皮间质转化（EMT）介导NSCLC的放疗敏感性。为验证这一假说，我们以H1299、A549等NSCLC细胞株及裸鼠为模型，采用实时RT-PCR、Western-blot、miRNA过表达、MTT等手段，在分子水平、细胞水平和动物体内实验来探讨miR-200c与NSCLC放疗敏感性的关系，力图阐明其通过阻断EMT介导NSCLC放射敏感性的可能的分子机制。本研究将从miRNA角度为探讨NSCLC放疗敏感性分子机制提供新的理论依据，为基于血浆miR-200c的NSCLC放疗疗效预测因子的开发奠定基础。

由于原标书的实验未得到阳性结果，故调整研究方向为“lncRNA POU6F2-AS2对食管鳞状细胞癌生长和辐射敏感性的影响及机制”。. 食管癌是世界范围内常见致死性癌症类型之一，特别是在中国的一些地区。食管鳞状细胞癌（OSCC）是食管癌的主要亚型，其发生与不健康的饮食习惯，吸烟，环境致癌物等有关。OSCC通常进展缓慢，但一经确诊时多为晚期。因此阐明OSCC发生发展的分子机制势在必行。长链非编码RNA（lncRNA）是一种由基因组转录出来的新型功能性成员，能够参与广泛的细胞进程，并在肿瘤起始和进展中起作用，被认为是临床上有希望的生物标记。我们最近确定了一种新型lncRNA POU6F2-AS2 (POU domain, class 6, transcription factor 2 ，POU6F2-反义2)大量且特定表达于OSCC中。临床前研究证明在OSCC模型中，POU6F2-AS2过表达具有辐射抗性，而敲除POU6F2-AS2具有辐射增敏性。此外，POU6F2-AS2与DNA修复相关蛋白Ybx1联合作用，该两种分子间的相互作用是OSCC细胞辐射抵抗的原因。基于上述应用，我们通过采用LncRNA 敲除/过表达、克隆形成、单细胞凝胶电泳、免疫荧光、Western blot、ChIP-seq、RNA pulldown、RIP等实验手段，在分子水平和细胞水平来探讨lncRNA POU6F2-AS2对食管鳞状细胞癌生长和辐射敏感性的影响及其可能的机制。结果如下：我们完成对POU6F2-AS2的初步鉴定，即一种在某种ESCC癌症亚型过表达并与肿瘤细胞的DNA修复活性相关的lncRNA（由彗星实验和克隆形成实验证实）。POU6F2-AS2直接以Ybx蛋白为目标, 对Ybx1的染色质定位是必不可少的。并且Ybx1能补偿或者反转POU6F2-AS2在DNA损伤应答中的作用。我们认为：POU6F2-AS2可称为一种新的预测OSCC癌症预后的生物标记候选，是构成食管癌生物学复杂度的有前途的新组分。