不同单倍型鸡体内MHC I类和II类基因差异表达影响MD致病性的分子机制

鸡马立克氏病（MD）是由马立克氏病病毒（MDV）引起的高度传染性肿瘤性疾病，其致病性与鸡主要组织相容性复合体（MHC）基因的多态性有关，但与MHC I类和II 类基因的表达水平的相关性尚不明确。本研究利用MHC B2单倍型和B19单倍型鸡群感染MDV超强毒株，在感染后不同时间采集脾脏、胸腺和法氏囊等主要免疫器官，通过称量各脏器的相对增重、利用荧光定量PCR测定脾脏的病毒载量、组织病理学检测等，分析其致病性。建立荧光定量PCR法，检测鸡脾内MHC I类基因BF1、BF2以及MHC II类基因BLB1、BLB2的mRNA表达量；制备和亲和纯化鸡上述2类基因的兔多抗血清，利用免疫蛋白质组学技术，分析4个基因的差异表达。经过统计学分析，深入研究在感染MDV后不同阶段，鸡体内MHC I、II类转录和翻译过程中的优势表达基因及其动态变化，以及与MD致病性的相关性，探索MD致病的MHC相关分子机制。

鸡的组织相容性起源于鸡血型的研究，导致移植排斥的MHC I类分子基因和红细胞抗原基因位于主要组织相容性复合体（MHC），因此鸡的血型鉴定、MHC核心区域单倍体型（B复合体）和免疫应答及鸡抗病免疫遗传之间存在很强的相关性。无特定病原体（SPF)鸡BW/G1、BW/G2、BW/G3、BW/G5、BW/G6和BW/G7等6个品系，分别具有与鸡马立克氏病（MD）敏感性有差异的B13、B15、B2、B5、B19和B21 等B复合体型分子遗传特征。本研究首先利用参照国际通用的方法，分别以各品系鸡的红细胞为免疫原，高频免疫其它品系鸡，制备了高效价的同种异型抗血清。红细胞凝集试验结果表明BW/G（n）鸡互相之间具有凝集活性，而同品系内个体间不发生凝集。该结果为BW/G（n）鸡的MHC单倍体纯合提供了血清学依据，为下一步研究保障了实验动物材料。.　　MHC I类分子在所有有核细胞表达，结合并递呈内源性抗原肽给CD8+ T细胞， MHC II类分子主要在抗原递呈细胞表面表达，结合并递呈外源性抗原肽给CD 4+ T细胞。为了进一步揭示不同淋巴细胞中MHC I类分子和II类分子的表达水平受MD感染的影响，利用MDV Md5株感染G3系（B2单倍型，抗性较强）和G7系（B19单倍型，致病性较强）雏鸡。结果表明，在21天的实验期内，G7鸡群的MDV meq基因平均拷贝数高于G3系，且病毒复制更快，更早从呼吸系统经过血液循环到达脾脏；编码MHC I类分子的优势表达的BF2基因在G3系中下调而在易感鸡G7系中上调；MHC II类分子重链编码基因BLB主要在脾脏中的B细胞中表达，表达受抑制；在法氏囊中，BF1基因仅在G7系中表达上调，而BF2基因在两系中的表达全部上调。结果表明，MD感染能同时影响鸡免疫器官中T、B淋巴细胞对MHC I类分子和II类分子的转录，抗性较强的品系抑制MHC I类分子的转录，但在法氏囊中却表达量上升，反映出不同淋巴细胞的组织和时间特异性。.　　MD是已知与鸡B复合体型最密切的致瘤性病毒病，自然条件下通过呼吸系统感染。为了利于比较IL-18 和IL-10的表达水平，分别建立了鸡IL-18 和IL-10的真核表达系以及单克隆抗体，并能检测到脾脏中的表达含量，为进一步研究细胞免疫应答差异提供了检测试剂。本研究利用我国唯一自主培育的MHC单倍型鸡，首次详细分析比较了对MD抗性不