心肌缺血预适应上调蛋白1通过调控CD36表达抑制巨噬细胞泡沫化

我们的前期工作发现心肌缺血预适应上调蛋白1(Mipu1)是一种具有细胞保护作用的核转录因子，它能抑制巨噬细胞泡沫化，但其作用机制不清楚。随后通过生物信息学分析发现CD36等多个清道夫受体基因启动子区含有Mipu1的DNA结合元件，进一步研究发现Mipu1在泡沫细胞形成过程中能够抑制CD36的表达。从而提出工作假说：Mipu1可能通过直接或间接调控CD36的表达抑制巨噬细胞泡沫化。本项目拟采用染色质免疫共沉淀及报告基因活性检测等技术探讨Mipu1是否直接调控CD36的转录表达；通过免疫共沉淀和质谱分析等技术探讨Mipu1是否与其它转录因子相互作用而调控CD36的表达；进一步利用基因转染和RNA干扰技术探讨Mipu1调控CD36表达在巨噬细胞泡沫化中的作用。本研究可望阐明Mipu1抑制巨噬细胞泡沫化的分子机制，为动脉粥样硬化的防治提供新靶点。

心肌缺血预适应上调蛋白1（Myocardial ischemic preconditioning upregulated protein 1, Mipu1)是一种新的KRAB/C2H2锌指蛋白超家族成员，对氧化应激诱导的细胞凋亡具有明显的抑制作用。但其在动脉粥样硬化（Atherosclerosis, AS）中的作用尚未见报道。本研究旨在探讨Mipu1对氧化低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的泡沫细胞形成的影响及其初步机制。用新西兰健康大兔复制AS模型，用自动生化仪检测血脂水平（TG, TC, LDL-C和HDL-C）的变化，苏丹Ⅳ染色观察动脉AS损害，WB检测Mipu1蛋白表达水平；用oxLDL孵育RAW264.7细胞复制泡沫细胞模型，转染pcDNA3.1-Mipu1建立Mipu1高表达的稳定细胞株（RAW264.7-Mipu1）；采用油红O染色，高效液相摄谱仪（HPLC）和Dil标记的脂蛋白等三种方法检测Mipu1过表达对脂质蓄积的影响；在RAW264.7-Mipu1细胞中转染CD36过表达质粒用恢复（rescue）实验检测Mipu1是否通过调控CD36表达抑制巨噬细胞细胞泡沫化；采用双荧光素梅报告基因和染色质免疫共沉淀技术检测Mipu1对CD36转录表达的调控作用。结果发现，高脂喂养可明显降低新西兰大白兔主动脉组织中的Mipu1表达；过表达Mipu1能明显抑制由oxLDL诱导的巨噬细胞内脂质蓄积、oxLDL的摄取和CD36启动子活性；转染CD36可恢复RAW264.7-Mipu1细胞内的CE、TC和FC水平；Mipu1能直接结合到CD36启动子区，oxLDL处理可增强Mipu1与CD36启动子区的结合。该研究提示Mipu1可通过直接调控CD36表达抑制巨噬细胞泡沫化。