自分泌胃泌素在胃癌细胞侵袭转移中的作用及分子机制

研究发现胃癌细胞自分泌胃泌素是胃癌发生发展的重要因素，且胃泌素原与肿瘤干细胞表面标志CD133共表达于胃肠道肿瘤细胞中，我们的研究也发现转移淋巴结中胃泌素基因的表达水平是原发胃癌组织的35倍。因此本课题设想侵袭转移的胃癌细胞可能来源于原发肿瘤中高表达胃泌素的细胞亚群，而胃泌素促进了癌细胞的侵袭和转移。为此本课题以胃泌素为表面标志，用免疫磁株分选原发胃癌组织中高表达胃泌素的胃癌细胞亚群，同时在体外转染胃泌素基因筛选高表达胃泌素的细胞克隆，建立来源于体内和体外、能自分泌胃泌素的胃癌细胞群。用体外侵袭转移实验、体内裸鼠成瘤和转移实验、新生血管形成实验、血管生成拟态实验、相关因子的检测等来研究高表达胃泌素的胃癌细胞群在体内、外的侵袭转移能力，再用胃泌素受体拮抗剂阻断胃泌素的作用，研究自分泌胃泌素在胃癌侵袭转移中的作用及分子机制，探索胃癌的转移过程，寻找有意义的治疗靶标，为胃癌的临床诊治奠定基础。

胃癌细胞自分泌胃泌素是胃癌发生发展的重要因素。本项目计划通过体外构建高表达胃泌素基因和沉默胃泌素基因的表达载体，建立高表达和低表达胃泌素的稳转细胞株，同时以胃泌素为表面标志，用免疫磁株分选原发胃癌组织中高表达胃泌素的胃癌细胞亚群，用体外、体内迁移、侵袭实验，血管拟态实验，新生血管形成及相关因子的检测，裸鼠体内成瘤等实验，研究高表达胃泌素的胃癌细胞群在体内、外的侵袭转移能力，再用胃泌素受体（也称为CCKB受体）拮抗剂阻断胃泌素的作用，研究自分泌胃泌素在胃癌侵袭转移中的作用及分子机制。. 取得的主要成果包括：（1）成功构建含胃泌素基因和沉默胃泌素基因的真核表达载体，筛选到高表达和低表达胃泌素的胃癌稳转细胞株；（2）胃泌素表达的高低能促进或抑制胃癌细胞体外增殖、迁移及侵袭能力，促进或抑制胃癌细胞分泌转移相关因子MMP-2和 VEGF；（3）CCKB受体阻断剂“丙谷胺”能抑制高表达胃泌素的胃癌细胞体外增殖、迁移和侵袭能力，证实胃泌素通过与CCKB受体结合而发挥作用；（4）成功从原发胃癌组织中分离到高表达胃泌素的细胞亚群，细胞在体外的增殖、迁移和侵袭能力均高于其它胃癌细胞群；（5）体内、外建立的高表达胃泌素细胞亚群在裸鼠皮下的成瘤能力均高于相应的对照细胞；（6）外源性胃泌素能促进胃癌细胞的增殖、迁移和转移能力，促进人脐静脉内皮细胞血管形成及胃癌细胞血管生成拟态形成；（7）发现胃泌素及其CCKB受体在人多种肿瘤组织和细胞中表达，尤其是发现胃泌素/CCKB受体环异位表达在消化道肿瘤外的其他肿瘤，如肺癌、乳腺癌等，并发现阻断CCKB受体能抑制多种肿瘤细胞的增殖，增加细胞凋亡。这些研究成果中有些属于首次报道，证实胃癌的转移可能来源于高表达胃泌素的细胞亚群，而自分泌的胃泌素促进胃癌细胞的侵袭和转移，且胃泌素/CCKB受体环在多种肿瘤的发生发展中有重要意义。这些研究成果将有助于探索胃癌的转移过程及其分子机制，也为胃癌的诊治提供了新的靶点，具有重要的科学意义和应用前景。