基于NAMPT/NAD+/SIRT1信号通路、miR-34a探讨调心方对早期阿尔茨海默病的干预机制

Alzheimer's disease (AD) is one of the major threats of aging population. The preliminary clinical studies have found that: AD patients with mild to moderate disease usually suffer Heart-qi deficiency; Tiaoxin Recipe can significantly improve the cognitive function. But the mechanisms underlying the role of Tiaoxin Recipe in intervening AD remain largely unknown. M accumulating evidence show that energy metabolism disorder promotes the development of AD, energy pathway of NAD+-SIRT1 play an important role in the early stages of AD. This project will set out to investigate the mechanism underlying the expression of NAMPT/NAD+/SIRT1/PGC-1α signaling protein and miR-34a in the early stage of AD, and to explore the mechanisms of Tiaoxin recipe, and to eventually answer the question whether Tiaoxin Recipe could improve metabolic disorders via increasing the expression of NAMPT or inhibiting the expression of miR-34a. Our study will identify the effective target of Tiaoxin Recipe and elucidate the molecular mechanism by which Tiaoxin Recipe intervening mild to moderate AD, and to provide experimental evidence for the treatment and prevention of AD by traditional Chinese medicine.

阿尔茨海默病（AD）是老年人群健康的主要威胁之一。本课题前期临床研究发现，轻中度AD患者以心气虚证为主，且调心方能够明显提高患者的认知功能，但机制尚未阐明。越来越多的证据表明, 物质能量代谢紊乱促进AD的发生发展，NAD+-SIRT1能量通路在AD病理损伤的早期阶段发挥着重要作用。本项目将探讨NAMPT/NAD+/SIRT1/PGC-1α信号通路以及miR-34a在早期AD发病进程中的参与机制，探讨调心方在其中作用的靶点。论证调心方可否通过直接或通过miR-34a上调NAMPT的表达来改善能量代谢紊乱，以期该研究能解析调心方干预早期AD病变的效应靶点和分子机制，为中医药防治AD提供新的实验室依据。

阿尔茨海默病（AD）是老年人群健康的主要威胁之一，因其发病机制复杂，越来越多的证据表明，物质能量代谢紊乱促进AD的发生发展，NAD-SIRT1能量通路在AD病理损伤的早期阶段发挥着重要作用。本项目选用24周龄APP/PS1转基因小鼠作为早期AD模型，以调心方配方颗粒进行干预，并予西药多奈哌齐、NAMPT抑制剂（FK866）、NAD+为对照，通过（1）小鼠空间学习记忆能力检测（Morris水迷宫）；（2）脑内β淀粉样蛋白沉积（Thioflavine S染色）；（3）脑内变性神经元检测（Fluoro-Jade B染色）；（4）脑内能量代谢相关分子的检测（生化法检测ATP和NAD+/NADH含量）；（5）NAMPT/NAD+/SIRT1/PGC-1α信号通路中关键蛋白的表达（Western blot、免疫组织化学法）；（6）miR-34a、NAMPT、NAD+、SIRT1、PGC-1α的mRNA表达（Real-time PCR法）结果显示：AD小鼠的空间记忆能力明显下降,而给予NAD以及调心方治疗后，AD小鼠的空间记忆以及探索能力有明显升高；在AD小鼠的早期即可有老年斑的沉积以及变性神经元的出现，而给予调心方治疗后，AD小鼠无论是皮层还是海马区域内的老年斑沉积以及变性神经元的减少；在早期AD中出现ATP、NAD的下降，而调心方能够提高ATP、NAD以及NAD/NADH的比率进而改善早期AD的能量代谢失调；AD小鼠在早期出现miR-34a的含量增高，而给予促进NAD以及调心方治疗后，AD小鼠无论是皮层还是海马区域内的miR-34a含量均有所降低；与空白组比较，APP/PS1组小鼠皮层和海马组织中NAMPT、SIRT1、PGC-1α mRNA以及蛋白水平降低，( p<0. 05) ，而给予调心方以及NAD治疗后，小鼠皮层和海马组织中NAMPT、PGC-1α mRNA以及蛋白水平有所升高( p<0.05) ，而SRT1的mRNA以及蛋白水平无明显变化(p>0.05)。.综上所述， NAMPT/NAD+/SIRT1/PGC-1α信号通路、miR-34a在早期AD的发病机制中起到重要的作用，且调心方能通过调控该信号通路中NAMPT、NAD+、PGC-1α以及miR-34a的表达实现其有效干预治疗，进而延缓AD的进一步发展，以期为调心方治疗AD的疗效机理提供充分的实验室依据。