脂肪组织来源许旺细胞的分离与鉴定及其应用于组织工程神经构建的实验研究

许旺细胞是构建组织工程神经的最佳"种子细胞"，然而传统的方法都需要牺牲自体神经来获取许旺细胞，造成供区损伤。本课题组从小鼠脂肪组织中获取了一种形态、生长规律及蛋白标志物均类似许旺细胞的双极样细胞，很有可能是穿过脂肪组织的细小神经纤维上的许旺细胞。为了证明这一从脂肪组织中获取的细胞是"许旺细胞"，本课题组拟通过流式细胞分析、免疫荧光等技术来观察这些细胞是否表达许旺细胞特异性标志物及其在脂肪组织中的定位，同时在体外培养观察其生长规律和神经生长因子的分泌等情况，以及与脂肪干细胞进行比较区分。最后将应用从EGFP转基因小鼠脂肪组织中获取的"许旺细胞"构建组织工程神经，修复其野生型小鼠的坐骨神经缺损，观察是否能形成髓鞘等功能性结构等。若通过本项目研究证明从脂肪组织中能获取自体许旺细胞，将为组织工程神经及神经损伤的细胞治疗提供新的细胞供区和来源及实验依据。

许旺细胞是周围神经修复中重要的种子细胞，其来源问题一直是困扰周围神经再生的主要难题。脂肪组织来源丰富，并且组织中分布着很多细小的神经纤维。本实验试图从脂肪组织中获取许旺细胞，并鉴定其在体内和体外的表型和功能。.本实验中采用小鼠腹股沟脂肪组织，通过HE染色、免疫荧光染色、透射电镜等方法，发现脂肪组织中确实存在细小的神经纤维及许旺细胞； 通过免疫荧光染色及荧光定量 RT-PCR观察从脂肪组织中分离获得的类许旺细胞的表型，结果显示这些细胞能够不同程度地表达S100 、P75NTR、MBP、Sox10 、NCAM等许旺细胞的特异性蛋白，但其表达率与坐骨神经来源的许旺细胞有所不同。ELISA检测类许旺细胞的培养液， 发现这些细胞能够分泌神经生长因子NGF和BDNF。.最后，将CAG-EGFP转基因小鼠的脂肪来源类许旺细胞回植并修复野生型C57BL/6J小鼠的3mm坐骨神经缺损。回植3个月和6个月后，取材观察发现，这些细胞在体内也能和坐骨神经来源的许旺细胞一样，形成髓鞘结构并促进神经再生。.因此，本研究证明了脂肪组织中确实存在许旺细胞。在体外，这些细胞的表型虽然与坐骨神经组织来源的许旺细胞的表型有所不同，但在体内都能促进神经再生并形成髓鞘结构。