益气活血法防治失神经肌萎缩的分子机制研究

Peripheral nerve injury can cause irreversible skeletal muscle atrophy, how to delay the occurrence and development of the denervated muscle atrophy is the key to the study currently. Denervated muscle atrophy belongs to the "flaccidity" in the TCM. Our preliminary research results show that the method of reinforcing qi and activating blood circulation has a good effect on the denervated muscle atrophy. Genechips results suggest that Angptl4 had up-regulation expression of mRNA obviously.On this basis, we will futher explore the molecular mechanisms of preventive and therapeutic effect on the denervated muscle atrophy by the method of reinforcing qi and activating blood circulation. we will study whether BYHWD can increace Angptl4 expression to improve microcirculation by the siRNA technology; research the role of the NF-KappaB/MuRFl signaling pathway and the apoptosis mechanism of delaying denervated muscle atrophy of BYHWD; find new molecular mechanism of BYHWD by the genechip and Proteomics technology. All these hope to illustrate that the method of reinforcing qi and activating blood circulation may delay the occurance and development of denervated muscle atrophy by improving the blood circulation and inhibition of protein degradation, which will provide the scientific basis for TCM treating denervated muscle atrophy.

周围神经损伤会造成骨骼肌不可逆萎缩，如何延缓及防治失神经肌萎缩的发生发展，是目前研究的关键。失神经肌萎缩属于祖国医学的"痿证"范畴，本课题组前期研究结果表明：益气活血法（补阳还五汤）对失神经肌萎缩具有较好的防治作用；药物作用后，芯片提示Angptl4基因表达明显上调。在此基础之上，本课题将进一步探索益气活血法对失神经肌萎缩的保护机制：应用siRNA技术探讨补阳还五汤是否通过上调Angptl4基因表达来延缓失神经肌萎缩的发生；研究NF-KappaB/MuRFl信号通路在补阳还五汤延缓失神经肌萎缩中的作用；探讨补阳还五汤延缓失神经肌萎缩的凋亡机制；并运用基因芯片与蛋白质组学技术寻找补阳还五汤对失神经肌萎缩起保护作用新的分子机制，以期说明：益气活血法可能是通过改善微循环，抑制蛋白降解途径防治失神经肌萎缩的发生，为中医药防治失神经肌萎缩提供新的科学依据。

本课题进一步研究了益气活血法（补阳还五汤）对失神经肌萎缩的保护作用。.1..构建LV3-Angptl4-RNAi慢病毒载体，运用RNAi干扰技术靶向阻断Angptl4基因表达。结果发现：补阳还五汤可有效促进大鼠展趾功能的恢复，显著增加复合肌动作电位波幅，延缓失神经胫前肌横截面积的减少与湿重比的降低，缓解胫前肌运动终板的退变，显著增加再生有髓神经纤维计数与髓鞘厚度。而靶向阻断ANGPTL4基因表达后，补阳还五汤对失神经肌萎缩的保护作用迅速降低。说明：此保护作用可能与Angptl4基因表达有关。.2..补阳还五汤还可能通过拮抗NF-KappaB/MuRFl信号通路抑制蛋白降解；促进Bcl-2表达与抑制Fas/FADD/Casp ase-8/Caspase-3通路抑制肌细胞凋亡，发挥延缓失神经肌萎缩的保护作用。 .3..基因芯片结果发现：与正常组比较，模型组1771个基因上调，涉及290个生物学过程：包括免疫反应、细胞分化等。并且在50个通路中富集，涉及炎症反应等。1545个基因下调，涉及274个生物学过程：包括能量代谢、基因表达、缺氧耐受等。下调基因在38个通路中富集，涉及能量代谢与细胞生长分化。此结果说明：与正常组比较，造模后细胞的炎症反应增加，细胞分化加快，并且伴有能量代谢降低。与模型组比较，补阳还五汤高剂量组有393个基因上调，涉及93个生物学过程。包括炎症、氧化还原、离子转运、应激、细胞死亡或凋亡调控等。并且在21个通路中富集，涉及抗炎反应与能量合成等。576个基因下调，涉及153个生物学过程，包括胶原合成、炎症、凋亡等。在17个通路中富集，涉及胶原合成、炎症反应。说明：补阳还五汤能通过增加能量供应，减少胶原纤维合成，降低凋亡等机制延缓失神经肌萎缩。.4..蛋白质质谱结果发现：模型组与正常组比较，共有32个差异蛋白。主要涉及能量代谢与胶原纤维合成。说明造模后，纤维蛋白原增多，能量代谢下降可能是引起失神经肌萎缩的主要原因。补阳还五汤高剂量组与模型组比较，共有21个差异蛋白，大多是参与机体能量代谢的关键蛋白。说明补阳还五汤作用后，可通过减少胶原纤维形成、增强机体的能量供应，延缓肌萎缩的发生。..