长链非编码RNA PCNA-AS1通过调控SOX4促进胆囊癌发生发展的作用及其机制研究

Gallbladder carcinoma is the most common malignant tumor in biliary system. Because of difficulty in early diagnosis and trend to invasion and metastasis, it is urgent to explore effective molecular targets. Recently, long non-coding RNA has been proved to play a very important role in tumorigenesis and development. In previous study, we found that lncRNA PCNA-AS1 was highly expressed in gallbladder carcinoma by lncRNA microarray. PCNA-AS1 effectively inhibited the proliferation and metastasis of gallbladder cancer cells. Moreover, PCNA-AS1 was an independent risk factor for the prognosis of patients with gallbladder cancer. Furthermore, the expression of SOX4 was down-regulated by silencing PCNA-AS1 in mRNA microarray. It was found that SOX4 may be the oncogene targeted by miR-133b by bioinformatics analysis. Therefore, we predicted that PCNA-AS1 could down-regulate the expression of miR-133b by effect of "molecular sponge". Thus, the expression of SOX4 was upregulated to promote the development of gallbladder carcinoma. In this study, we would explore the relationship between PCNA-AS1, miR-133b and SOX4, and identify the downstream signaling pathways of PCNA-AS1 in order to provide new strategies for the early diagnosis and accurate treatment of gallbladder carcinoma.

胆囊癌是胆道系统最常见的恶性肿瘤，早期诊断困难且易发生侵袭转移，预后极差，故亟需探索有效的分子靶点。目前研究证实长链非编码RNA在肿瘤的发生发展过程中起到了十分广泛而关键的作用。我们通过lncRNA芯片筛选发现lncRNA PCNA-AS1在胆囊癌中高表达。前期研究表明敲减PCNA-AS1后能有效抑制胆囊癌细胞的增殖和转移能力，且PCNA-AS1是影响胆囊癌患者预后的独立危险因素。mRNA芯片结果显示沉默PCNA-AS1后能使癌基因SOX4表达下调。通过生物信息学分析发现SOX4可能是miR-133b的靶基因。因此我们预测PCNA-AS1可能通过“分子海绵”作用下调miR-133b表达，从而影响SOX4来促进胆囊癌发生发展。本课题中，我们将深入研究PCNA-AS1、miR-133b及SOX4三者之间的相互关系，探寻PCNA-AS1影响的下游信号通路，为胆囊癌的早期诊断和精准治疗提供新思路。

胆囊癌是胆道系统最常见的恶性肿瘤，早期诊断困难且易发生侵袭转移，预后极差，故亟需探索有效的分子靶点。目前研究证实长链非编码RNA在肿瘤的发生发展过程中起到了十分广泛而关键的作用。本课题通过对胆囊癌患者癌和癌旁组织的lncRNA表达谱芯片筛选，锁定了一条在胆囊癌中具有生物学功能的lncRNA PCNA-AS1进行深入研究。通过对53对胆囊癌患者癌和癌旁组织RNA验证发现，PCNA-AS1在肿瘤组织中的表达量明显高于癌旁组织。敲减了PCNA-AS1之后能有效抑制胆囊癌细胞增殖及侵袭转移能力。通过对患者临床病理资料研究发现，PCNA-AS1的表达与患者的肿瘤大小、浸润深度、淋巴转移及病理分期相关，PCNA-AS1的表达情况是影响患者预后的独立危险因素，且高表达PCNA-AS1的患者其总体生存率较差。提示PCNA-AS1的表达与患者的预后密切相关。敲减PCNA-AS1之后其下游的癌基因SOX4的表达显著下降，敲减SOX4之后能有效抑制胆囊癌细胞的增殖以及转移能力。. 为了进一步明确PCNA-AS1在胆囊癌中的作用机制，我们首先通过预测网站，预测可能与PCNA-AS1结合的miRNAs及下游靶基因，通过生物信息学分析，我们预测PCNA-AS1可能是调控miR-133b影响SOX4的表达从而发挥其生物学功能。通过双荧光素酶报告基因实验及MS2-RIP实验，证实了PCNA-AS1与miR-133b，miR-133b与SOX4之间存在直接相互作用，并确定了他们之间的相互结合位点。进一步通过回复实验验证了这一结论。. 针对胆囊癌对放化疗不敏感这一现状，我们建立了针对胆囊癌的药物筛选平台，筛选出冬凌草甲素对胆囊癌细胞有明显的杀伤效果。我们将经冬凌草甲素处理前后的胆囊癌细胞株通过lncRNA芯片筛选及分析，我们预测PCNA-AS1可能介导冬凌草甲素的抗肿瘤效应。冬凌草甲素作用后，胆囊癌细胞PCNA-AS1表达量明显降低。. 本课题从lncRNA-miRNA-mRNA三者之间的调控关系来解析PCNA-AS1与胆囊癌之间的联系，深入探索PCNA-AS1发挥生物学功能的分子机制，为胆囊癌早期诊断及治疗提供新的靶标。同时筛选到了冬凌草甲素这一药物对胆囊癌细胞有明显的杀伤效果，且PCNA-AS1可能介导冬凌草甲素的抗肿瘤效应，提示冬凌草甲素可作为胆囊癌精准治疗的候选药物。