山萘酚沉默Notch通路调控上皮间质转化逆转卵巢癌化疗耐药的机制研究

Drug resistance is an important factor in ovarian cancer recurrence and treatment failure，reversing chemoresistance becomes a research focus. It has been reported that the active ingredient of kaempferol in Smilax china L. can increase sensitivity to cisplatin chemotherapy for ovarian cancer, but the mechanism is unknown. Our previous study found that the crude extract of Smilax china L. could block ovarian cancer cells in /G2/M phase and induce apoptosis. Furthermore, significant growth inhibition and down-regulation of NICD, cMyc and up-regulation of p21 in Notch pathway were found following kaempferol treatment in ovarian cancer cells. Epithelial-mesenchymal transition (EMT) is an important process in the formation of tumor cell resistance. Studies have shown that Notch pathway contributes to tumor cells acquire EMT phenotype and involves in the formation of drug resistance. Therefore, we hypothesize that kaempferol is probably through silencing Notch pathway signaling proteins, regulating the expression of EMT-associated protein and nuclear transcription factor, and thus reversing chemotherapy resistance in ovarian cancer. In this study we plan to use Laser microdissection, Laser scanning confocal microscope, In vivo imaging technology to validate our hypothesis, and clarify the fine mechanism of kaempferol silencing Notch pathway and regulating EMT ，and then to provide a new idea for the reversal of chemotherapy-resistant in ovarian cancer.

化疗耐药是卵巢癌复发和治疗失败的重要因素，逆转化疗耐药为卵巢癌研究的热点。相关研究表明菝葜中的有效成分山萘酚能够提高顺铂对卵巢癌化疗的敏感性，但作用机制不明。我们前期研究发现菝葜粗提取物能将卵巢癌细胞周期阻滞在G2/M期并诱导其凋亡，山萘酚可有效下调卵巢癌细胞Notch通路的活性形式NICD和下游靶标cMyc表达并上调p21表达。上皮间质转化（EMT）的形成是肿瘤细胞发生耐药的重要过程，Notch通路活化有助于肿瘤细胞获得EMT表型而参与细胞耐药形成。因此，我们提出假说：山萘酚很可能通过沉默Notch通路而调控EMT逆转卵巢癌化疗耐药。本课题拟采用激光显微切割、激光扫描共聚焦和动物活体成像等先进技术，在细胞和动物水平上，对此假说进行验证，揭示山萘酚沉默Notch通路调控EMT的精细分子机制，为逆转卵巢癌化疗耐药研究提供新的思路。

化疗耐药是卵巢癌复发和治疗失败的重要因素。研究表明菝葜中的有效成分山萘酚能够提高顺铂对卵巢癌化疗的敏感性，但作用机制不明。我们研究发现山萘酚对卵巢癌细胞有较强的抑制作用，能够有效诱导卵巢癌细胞凋亡，山萘酚可有效下调卵巢癌细胞Notch通路的活性形式NICDmRNA、Hes1mRNA、Hes6mRNA的表达，同时下调Notch信号通路上关键蛋白Notch1、Notch3、 P21Waf1， VEGF的表达，促使Notch信号通路失活。上皮间质转化（EMT）的形成是肿瘤细胞发生耐药的重要过程，Notch通路活化有助于肿瘤细胞获得EMT表型而参与细胞耐药形成。我们研究发现山萘酚可调控EMT相关蛋白及核转录因子的表达，山萘酚对卵巢癌细胞上皮间质转化过程中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达有显著影响。结合以上我们推测山萘酚很可能是通过沉默Notch信号通路从何抑制卵巢癌细胞获得EMT表型发挥抗肿瘤耐药作用。另外本课题发现E-cadherin在体内低表达与卵巢癌患者的差预后具有正相关性，进一步提示E-cadherin很可能是卵巢癌预后的生物标记物之一，为后期卵巢癌预后的诊断提供了一定的基础。为提高山萘酚的生物利用度，本课题组对山萘酚-仿生肽纳米靶向制剂进行了研究，以更好的发挥其抗肿瘤的药效，并得到了湖北省自然科学基金的资助。.鉴于山萘酚具有多靶点，多效应，安全性好及毒副作用小的综合优势及化疗药物常引起其他并发症如心肌损伤等，本课题组同时对TRPV4通道在心肌细胞的缺氧/复氧损伤中的有关机制进行了探讨。发现TRPV4通道在心肌细胞上功能性的表达，而且H/R后TRPV4表达增加和功能增强，并在H/R过程中起关键作用。TRPV4通道有望成为心肌H/R损伤中新的治疗靶点。抑制TRPV4通道减轻心肌氧化应激损伤的保护作用机制主要为上调AKT / Nrf2/ARE信号分子通路。