STAT1在HBV对IFNα产生耐药中的作用

Due to its antiviral and immunomodulatory effects, Interferon alpha (IFN-α) has been widely used as one of the best treatment options for patients suffering from chronic hepatitis B (CHB) infection all over the world. Unfortunately, after long-term use of IFNα or peg-IFNα, only a minority of patients can be cured, and hepatitis B virus (HBV) resistance to IFNα increases monthly. In order to enhance the long-term efficacy of IFNα against HBV, the mechanism responsible for HBV resistance to IFNα treatment will be explored and an appropriate intervention will be found. In our study, to establish the IFNα-resistant cell model, HepG2.2.15 cells will be stimulated intermittently by low concentrations of IFNα for about 9-15 weeks, and the decline of inhibiting rate of therapeutic dose IFNα is choosed as the evaluation criteria. Some important molecules are examined, including different states of STAT1 (phosphorylated STAT1, acetylated STAT1, methylated STAT1). In order to reveal IFNα-resistant gene mutation and molecular mechanism, some interventions are used, such as JAK inhibitor, histone deacetylases inhibitor(HDACi) and S-adenosylmethionine(SAM). At the same time, to find some measures to delay the resistance, a clinical trial is designed as followed. Some Collected CHB cases are devided into two groups(IFNα-sensitive and IFNα-insensitive), the clinical efficacy of IFNα along with SAM are measured.

IFNα具有抗病毒和免疫调节作用，是用于慢性乙型肝炎(CHB)治疗的首选药物之一。但无论是普通IFNα还是长效IFNα，长期应用后抗HBV作用会明显下降，HBV对之产生耐药性。探索HBV对IFNα产生耐药性的机制，寻找相应的干预措施，将大大提高IFNα抗HBV长期疗效，为CHB治疗带来新的突破。 本研究拟通过低浓度IFNα长期间断刺激HepG2.2.15细胞，以治疗剂量IFNα对HBV抑制率的下降程度为评价标准来建立耐IFNα的HBV细胞模型。比较宿主细胞基因突变情况及干扰素JAK-STAT通路中信号物质的变化，其中重点考查STAT1不同状态（磷酸化、乙酰化、甲基化）对HBV耐药性的影响，并用组蛋白去乙酰化酶抑制剂、S-腺苷甲硫氨酸等干预，来揭示HBV产生耐药性的基因变异情况和分子机制。同时收集耐IFNα的CHB病例，比较加用SAM后IFNα的临床疗效，为寻找延缓耐药性产生的措施作下铺垫。

IFNα具有抗病毒和免疫调节作用，是用于慢性乙型肝炎（CHB）治疗的首选药物之一。但无论是普通IFNα还是长效IFNα，长期应用后抗HBV作用会明显下降，HBV对之产生耐药性。探索HBV对IFNα产生耐药性的机制，并寻找相应的干预措施，将大大提高IFNα抗HBV长期疗效，为CHB治疗带来新的突破。.本研究通过低浓度IFNα长期刺激HepG2.2.15细胞，以治疗剂量IFNα对HBsAg、HBeAg、HBV DNA的抑制率的下降程度为评价指标，来建立耐干扰素的HepG2.2.15细胞模型。结果发现，经不同低浓度IFNα-2b持续诱导可使HepG2.2.15 对IFNα-2b的敏感性下降，HBsAg、HBeAg、HBV DNA的抑制率均出现不同程度下降，其中经50 IU•mL-1 IFNα-2b持续诱导36周下降抑制率最多，分别降低了38.64%、15.71%、30.17%，故确定该条件为最佳造模条件。该耐IFNα的HBV细胞模型的建立为耐IFN新药筛选提供了有效工具。.随后，我们比较耐药前后宿主细胞基因突变情况，发现HBV自身基因无突变，但宿主细胞相关基因的表达差异性很大，其中JAK-STAT通路中的相关基因表达有统计学意义。同时，我们比较了耐药前后STAT1不同状态（磷酸化、乙酰化、甲基化）对变化情况，并用JAK抑制剂Ⅰ、组蛋白去乙酰化酶抑制剂（TSA）、S-腺苷甲硫氨酸（SAM）干预，发现耐IFNα后其宿主细胞STAT1磷酸化和甲基化水平出现不同程度降低，JAK抑制剂Ⅰ、TSA可使STAT1磷酸化进一步受抑制，抗病毒效应蛋白OAS1产生减少；而SAM可使STAT1甲基化增强，OAS1产生增加。这表明采取干预措施恢复STAT1磷酸化和甲基化水平有助于提升宿主细胞对IFNα的敏感性。该研究为提高IFNα抗HBV长期疗效和耐干扰素的抗HBV新药开发提供了新的干预靶点，将为CHB治疗带来新的突破。