新生隐球菌群体效应系统外分泌蛋白的研究

群体效应是一种细胞与细胞间的通讯系统，调节细菌群居行为及特殊基因表达的有效机制。真菌生物膜是一个群体组织，由许多微菌落组成，各个细胞间存在着严密的信号传导系统交流信息，大量对于病原真菌的群体效应系统的研究都基于真菌生物膜的形成、发展过程。研究显示隐球菌生物膜的形成对真菌的致病性、药物敏感性等生物学特性有较大影响。对于隐球菌的群体效应系统，及其在生物膜形成、隐球菌致病和耐药方面的研究还很少见。.本项目拟对隐球菌生物膜状态与悬浮状态细胞外泌蛋白进行比较蛋白质组学研究，，从整体层面认识了该病原菌的群体调控体系，找出与其群体效应相关的生物信号分子，从分子水平阐明隐球菌群体效应的发生及发展机制，进一步认识新生隐球菌的群体效应系统，明确其在生物膜形成、隐球菌致病和耐药方面的分子学基础，开发以隐球菌群体效应为靶点的新型抗真菌药物或治疗手段提供理论依据。

通过构建新生隐球菌体外生物膜态和悬浮态模型，发现其在微孔板上可以形成典型的、成熟的生物膜结构，其形成过程有早期、中期、晚期3个阶段。新生隐球菌生物膜活性随培养时间延长而增加，48h后代谢活性相对稳定。利用ITRAQ技术分析外分泌蛋白，共找到3种差异蛋白。通过构建外分泌蛋白基因缺失株，从分子水平阐明对其形成、生长及毒力影响，综合文献及实验，确定VID为真正的差异蛋白，同时建立其体内模型，进一步验证差异蛋白功能，为开发以隐球菌群体效应为靶点的新型抗真菌药物或治疗手段提供理论依据。