转甲状腺素蛋白化学修饰在老年性淀粉样变形成中的机制研究

转甲状腺素（TTR）蛋白为老年性淀粉样变和家族性淀粉样变多发神经损害患者，淀粉样变的前蛋白。生理条件下四分子TTR与T4形成聚合体，但沉积于组织为纤维状结构。本研究（1）用MLDI-TOF/MS和毛细管电泳法，测定随着老化人血清TTR蛋白化学修饰的类型和比例，分析老化与TTR修饰的关系；进一步比较老年性淀粉样变患者血清TTR蛋白和组织内沉积TTR淀粉样变纤维的化学修饰的类型和程度的变化特点，探索老年性淀粉样变TTR蛋白化学修饰的特性。（2）用核磁共振的方法，分析TTR蛋白修饰类型和程度因素对TTR蛋白分子中α结构和β结构比例的影响，探讨化学修饰对TTR蛋白稳定性的影响。（3）进一步利用免疫组织化学方法探索淀粉样变沉积内产生化学修饰的酶类成分。从TTR蛋白发生化学修饰的类型和程度与淀粉样变形成的关系，阐明老化因素在TTR蛋白淀粉样变的形成机制，为预防和延缓老年性淀粉样变的形成提供科学方法。

转甲状腺素（Transthyretin, TTR）蛋白为老年性淀粉样变和家族性多发性神经损害（FAP）淀粉样变的前蛋白，生理条件下四分子TTR蛋白与T4形成聚合体，但当TTR形成蛋白纤维时能够沉积于组织，导致多器官机能损害。本研究集中在老年性淀粉样变前蛋白化学修饰与淀粉样变形成的关系。首先利用2D电泳结合Western Blod技术分析健康人和老年性淀粉样变患者血清TTR均发现TTR具有不同pI，提示TTR有发生修饰可能，进一步利用MLDI-TOF-MS分析发现健康人和老年性淀粉样变患者血清TTR蛋白发生修饰类型为Sys-TTR, Gly-Gly-TTR型化学修饰。随着年两增加Methyl CDEHKNRQ 和Hydroxyl DKNP 型修饰增加。在此研究基础之上，利用ELISA方法测定血清TTR含量水平，结合人血清蛋白特点，建立MALDI-TOF-MS测定血清建立血清TTR蛋白的方法，能够用于临床检测血清TTR的突变和TTR蛋白发生的类型。. ProteomeLabTM-2D技术是基于蛋白pI进行分离的技术，比较对照组与老年性淀粉样变患者发现ThT有增高趋势，提示TTR淀粉样变由血液产生的可能，进一步本组发现TTR淀粉样变患者血管内存在淀粉样变成分，证实了研究的假设。为进一步分析老年性淀粉样变机制，ProteomeLabTM-2D技术分析血清不同pI部分淀粉样变荧光强度，结果pI4.5-5.5部分ThT淀粉样变荧光强度增加明显，利用MALDI-TOF-MS分析sys-TTR修饰型增多，提示修饰性可能与淀粉样变形成相关。选择淀粉样变患者组织，首先利用Congo Red染色阳性，同时利用偏振光显微镜确定组织内淀粉样变沉积。TTR免疫组织化学染色确定为TTR蛋白沉积，同时利用抗人MPO抗体染色与CR染色重叠，提示MPO与淀粉样变共存，酶代谢可能造成TTR淀粉样变的修饰。研究结果提示机体内MPO代谢修饰诱导TTR发生修饰能够参与TTR淀粉样变的形成。但是机体内TTR修饰与发生沉积过程还需要进一步解析。