VEGF/VEGFR3/Ang/Tie2途径介导的淋巴管生成与功能异常在鼻息肉发病机制中的研究

Lymphatic system plays an important role in the initiation of immune responses. The mechanism involved in the pathogenesis of nasal polyposis is far from clear. Recent evidences have shown that lymphangioenesis and dysfuction takes a key part in edema and inflammation of airway diseases. Our recent research results suggested that, hypoxia regulates IL-17a secretion from NP, and decreased lymph vessel density in sub-mucosa. Therefore, we propose lymphangioenesis and dysfuction play a key role in the pathogenesis of NP, even the high recurrence.Concrete research contents include: ①analyze the lymphangioenesis and dysfuction in NP by using immunofluorescence,RT - PCR and protein microarray, screen out associated factors.②detect the activity of Lymphatic endothelial cells induced by the associated factors, and the correlation between LECs and DC、Eos、Mon/M.③animal models will be performed to test the associated way in vivo.④induce associated factors demethylation in vitro by using demethyl-agent.Massarry, ELISA and FACS will be performed to test whether epigenetics modified could alter the process of NP. The project will explain the pathogenesis of NP from lymphatic perspective,even the high recurrence.Future NP therapies target might be exploited and intervened using epigenetic method.

最新研究发现，毛细淋巴管生成对气道炎症刺激敏感且是某些炎症性疾病进程的强有力参与者。我们的研究显示，鼻息肉上皮细胞在低氧条件下发生以IL-17A表达减少为特征的异常黏膜免疫应答，同时黏膜下淋巴管密度减少，血管通透性增强，提示鼻息肉黏膜对低氧等炎症刺激具有独特的病理生理学机制，而淋巴管生成及其功能异常可能是鼻息肉发病乃至高复发率的关键。课题拟行：①免疫荧光、RT-PCR、蛋白芯片等明确鼻息肉组织中VEGF/VEGFR3/Ang/Tie2途径介导的淋巴管生成与功能异常相关调节因子；②体外检测淋巴管内皮细胞经相关因子诱导后免疫活性变化，确定诱导后LECs对DC、Eos、Mon/M细胞的免疫学功能的调控及途径；③体内实验明确该途径在鼻息肉发病中的作用；④Massarry、ELISA、流式等检测相关因子表观遗传变化并干预。揭示鼻息肉发病中淋巴管生成与功能障碍及其免疫调节机制，寻找鼻息肉治疗新靶点。

慢性鼻窦炎伴鼻息肉是耳鼻喉科常见疾病，根据最新的统计发病率高达14%到16%。随着鼻内镜技术广泛应用，该病的手术治疗已经取得一定进步，但近十年的随访研究发现，即使进行和合理的药物治疗和规范的手术治疗后，复发率高达35%-75%，甚至部分患者常需进行反复多次手术治疗，随之而来的沉重社会和经济负担。所以，寻找造成该病复发率高的原因和如何控制其术后的复发率，已经成为了目前该病亟待解决的问题。循环系统是机体最基本的进行物质交换的场所，遍布人体各器官，于皮肤和黏膜下尤其密集，是人体免疫应答发生的源头及主要场所。血管和淋巴系统是脉管系统重要的组成部分，共同构成的微循环，维持机体的体液平衡，参与多种病理生理过程，例如：肿瘤转移、创伤修复、移植物排斥等，也是炎症过程的重要调节器。本课题通过1通过免疫荧光双染的方法（CD31荧光标记血管内皮细胞标志物和NG2荧光标记周细胞标志物），研究不同病理类型的鼻窦炎患者的组织中血管周细胞（pericyte，PC)的覆盖情况，并与组织中嗜酸性细胞的浸润程度、水肿程度、内镜评分、CT评分、复发率等病理和临床特征进行相关性分析。同时，通过免疫组化、酶联免疫吸附试验ELESA、实时定量PCR等方法，进一步研究不同病理类型的鼻窦炎患者的组织中血管生成相关的细胞因子：血管内皮生长因子（VEGF-A）及其受体（VEGFR1）和血管生长因子(Ang-1/Ang-2)；周细胞相关的细胞因子：血小板源性生长因子（PDGF-BB）及其受体PDGFβR；以及组织重塑相关的TGF-α、β等的表达情况，探讨鼻息肉中血管周细胞在其发病机制中的作用，以及其可能参与的调控通路。通过将鼻息肉组织进行气液-整体组织块培养，并给与不同的刺激物刺激24小时（地塞米松，Ang-2, PDGF-BB重组蛋白，以及PDGFβR阻断剂）。再通过免疫荧光、免疫组化、ELESA、qRT-PCR等方法对组织块中的血管周细胞覆盖情况，相关细胞因子表达情况进行研究，为鼻息肉的治疗提供新的思路和治疗策略。