雷公藤多苷对溃疡性结肠炎TLR4信号通路及对微小RNA调控通路信号的影响研究

Traditional Chinese medicine uses tripterygium glycosides (TWP) for the treatment of autoimmune diseases. Ulcerative colitis (UC) is associated with autoimmunity, whereas the ability for TWP to treat UC has been rarely reported. Our clinical practice shows that TWP has good effect, but its mechanism of action is still unknown. Recent discoveries of TLR4 signaling pathway in the pathogenesis of UC is the key, some miRNAs in TLR4 signaling pathway play a regulatory role, so we think TWP is related to the TLR4 signaling pathway with miRNA. The project will carry out the study of TWP on UC rats intestinal mucosal TLR4 signaling pathway, on the upstream channel signaling (TLR4), downstream of the MyD88 dependent pathway signaling (MyD88, TRAF-6, TNF-a, IL-1β)and MyD88 independent pathway signal(TRAM, TRIF, IFN-γ); on the feedback regulation of miR-155, miR-9, miR-146a, thereby revealing the influenced links and targets of TWP on the TLR4 signaling pathway, so as to clarify its mechanisms of action, and provide basic data for clinical application and follow-up research on TWP.

中药雷公藤多苷（TWP）用于自身免疫性疾病治疗已共识，溃疡性结肠炎（UC）与自身免疫有关，而TWP治疗UC的报道甚少，我们临床实践显示其具有较好疗效，但其作用机制不明。近年发现TLR4信号通路是UC发病的关键，而一些miRNAs对通路的信号有调控作用，故我们认为TWP的作用与miRNA调控的TLR4信号通路有关。本项目开展TWP对UC大鼠肠粘膜TLR4信号通路影响研究，观察其对上游通路信号（TLR4）、下游MyD88依赖通路信号（MyD88、TRAF-6、TNF-a、IL-1β）以及非MyD88依赖通路信号（TRAM、TRIF、IFN-γ）的影响；观察其对miR-155、miR-9、miR-146a 调控通路信号的影响，从而揭示TWP对TLR4信号通路的影响环节及作用靶点，初步阐明其作用机制，为临床应用及后续的研究提供基础资料。

中药雷公藤多苷（TWP）用于自身免疫性疾病治疗已共识，溃疡性结肠炎（UC）与自身免疫有关，TWP治疗UC报道甚少，我们临床上显示其具有较好疗效，但其作用机制不明。近年发现TLR4信号通路是UC发病的关键，而一些miRNAs对信号通路有调控作用，故我们认为TWP的作用与miRNA调控的TLR4信号通路有关。本项目开展TWP对UC大鼠TLR4信号通路影响研究，观察其对上游通路信号（TLR4）、下游MyD88依赖通路信号（MyD88、TRAF-6、TNF-a、IL-1β）以及非依赖通路信号（TRAM、TRIF、IFN-γ）的影响；观察其对miRNA调控通路信号的影响，揭示TWP对TLR4信号通路的影响环节及作用靶点。项目从动物、细胞、miRNA三个层面进行研究。动物研究中，我们发现TWP各剂量组疗效呈剂量依赖性，随着浓度升高疗效增加；TWP高剂量组与硫唑嘌呤（AZA）组无差异，说明TWP高剂量的疗效与AZA相当，TWP及AZA抗炎基本途径相同，均为TLR4/MyD88依赖途径及非依赖途径，对于TLR4信号通路上游分子，TWP亲和性优于AZA，但对于末端炎症因子（IL-1β、TNF-α，IFN-γ），AZA优于TWP；在细胞研究中，TWP显现出抑制TNF-α及IL-1β的作用，下调TLR4、NF-kB p65受体的表达是其作用的机制之一；miRNA芯片结果显示，正常组与模型组对比有68个差异miRNA，根据文献及数据库分析，其中6个miRNA与UC发病密切相关（miR-146a-5p, miR-146b-5p, miR-126a-3p, miR-21-5p, miR-200b-3p和miR-145-5p），初步发现这些miRNA能调节与炎症发生相关的信号通路（如Jak-STAT信号通路等），TWP对其具有上调或下调作用。进一步IPA分析发现，miRNA与mRNA 之间形成复杂的关系网络，一个miRNA 可以调节多条mRNA 信号通路，一条mRNA 信号通路受到多个miRNA 的调节，miRNA之间、mRNA之间也存在多种相互作用。本项目研究成果验证了TWP通过调控miRNA调节TLR4信号通路控制炎症反应的推测，并一定程度上阐明TWP治疗UC作用机制，揭示TWP 通过调节miRNA 调控TLR4 信号通路治疗UC 的影响环节及作用靶点，为临床应用及后续的研究提供基础资料。