补肾中药调节成骨细胞和软骨细胞功能的规律研究

骨质疏松症与颈椎病的相关性已经从流行病学、细胞生物学和临床实践得到证实，成骨细胞及软骨细胞的过度凋亡是二者发病的基础。具有补肾功效的抗骨质疏松药物对颈椎病也具有防治作用。为了阐明中医补肾法对这两种疾病的疗效机制，本项目通过补肾方对家兔、大鼠两种颈椎间盘退变动物模型，大鼠、基因敲除小鼠两种骨质疏松动物模型，家兔、大鼠椎间盘细胞和大鼠、小鼠成骨细胞进行干预，观察细胞生长情况、颈椎间盘与椎体细胞中基因和蛋白表达的变化情况，研究该方对颈椎间盘退变和骨质疏松的治疗作用，为颈椎间盘退变与骨质疏松异病同治提供理论支持。

1建立补肾方等药物含药血清的制备方法，并在细胞模型上验证其促进成骨细胞生长效应：. 8周龄雌性SD大鼠120只按随机数字表随机分为4组，即对照组、补肾方组、戊酸雌二醇组、莫比可组，用含药血清分别干预原代培养的成骨细胞、软骨细胞，抽提纯化总RNA，利用Steponeplus荧光定量PCR仪完成rGAPDH、rAkt1、rALPL等16个基因转录表达差异的定量分析，提示随着含药血清对原代细胞培养时间的延长，含补肾方的大鼠血清显著提高了成骨细胞特异性基因如碱性磷酸酶ALPL、I型胶原Col1a2、骨钙素BGP的转录表达，基质金属蛋白酶抑制剂TIMP-1的转录表达在补肾方干预的第2天显著升高，有效控制了MMP-13基因的过高转录对II型胶原Col2a1的降解作用，在干预的第6天II型胶原Col2a1转录表达显著提高.2建立去卵巢骨质疏松症大鼠模型，并在动物模型上验证补肾方改善骨微结构效应：.12周龄雌性SD大鼠80只按随机数字表随机分为4组，即正常组、对照组、补肾方干预组和戊酸雌二醇干预组。3个月的给药时间股骨微结构的改善明显优于1个月的给药时间。相同时间给药后，股骨微结构参数变化. 经补肾方干预1个月后，股骨骨量增加，是生理盐水组的1.53倍, 经补肾方干预3个月后，股骨骨量明显增加，是生理盐水组的2.88倍。.3建立动静力失衡大鼠模型，并在动物模型上验证补肾方改善骨微结构效应：. 12周龄雌性SD大鼠40只按随机数字表随机分为4组，即正常组、对照组、补肾方干预组和莫比可干预组。结果显示补肾方可显著改善骨微结构，对去动静力失衡所致颈椎间盘退变所至颈椎骨微结构有较好的改善作用。.4 采用OPG基因敲除小鼠骨质疏松模型，采用血管造影术进一步探讨补肾方通过促进毛细血管生长改善骨质疏松效应：. 24周龄OPG基因敲除小鼠40只按随机数字表随机分为4组，即对照组、补肾方干预组、戊酸雌二醇干预组和莫比可干预组，24周龄同品系C57野生型小鼠10只为正常组。结果显示补肾方可显著促进腿部毛细血管分枝生长。.5 采用miRNA芯片技术，获得补肾方处理成骨细胞、软骨细胞miRNA表达谱，为继续探讨补肾方干预策略提供miRNA调控靶标。经miRNA芯片筛选，从补肾方干预的软骨细胞中获得2倍以上表达变化的miRNA共计121个，其中上调的53个，下调的68个。