封闭式负压引流结合细胞培养基滴注促进缺血创面愈合的机理

血管病变和感染是多种慢性溃疡的共同病因。难以纠正的局部循环障碍使溃疡处细胞某种程度从体内环境中"孤立"出来，可考虑在局部用细胞培养技术给细胞提供直接支持，并用封闭式负压引流（VAC）控制创面感染，两者的结合还有可能产生多种整合效应，从而在溃疡处形成适合细胞生长的微环境。本研究在前期临床工作基础上通过构建兔耳缺血创面的VAC+流动细胞培养基（CFM）滴注模型和体外成纤维细胞培养的VAC+CFM滴注模型，利用创面分析软件、倾注平板细菌定量、BrdU标记、流式细胞和原位杂交、免疫组化、RT-PCR、ELISA、Western Blot等方法从整体到细胞多层面比较常规细胞培养、CFM培养、单纯VAC及VAC+CFM对促进成纤维细胞增殖、创面修复和细菌清除等的差异；优化VAC吸引压力和模式、CFM成分和流速等参数；探讨可能的物理机制和生物机制，以更好地指导临床实践并有可能为治疗缺血性创面开辟新途径。

自从封闭式负压引流技术（NPWT）被用在伤口治疗以来，其加快伤口愈合，控制伤口感染的优势已获广泛认同，但NPWT在缺血伤口的治疗上效果差异较大，特别是对严重缺血的伤口效果较差。为此，本项目提出把缺血部位的伤口细胞看作某种程度上从体内环境中“孤立”出来，因此可以在使用NPWT技术的同时结合使用细胞培养技术给缺血部位的伤口细胞提供直接的支持（流动细胞培养基滴注，CFMD），从而形成“在体的体外细胞培养”，并推测NPWT和CFMD有可能在发挥各自效应的同时，还可以产生整合效应。我们认为，该理念的提出是对NPWT技术的一大延伸。. 除了理念的创新外，我们在NPWT的体外细胞实验方法和动物实验方法方面进行了多方面的改进。建立了完整的NPWT的体外细胞培养系统和观察检测平台。在保证动物实验的NPWT装置牢固可靠方面以及改进动物实验的观察检测手段方面找到了较好的解决办法。而此前由于方法学的限制，整个NPWT的研究绝大多数是临床病例观察加上少量的动物实验，因此关于NPWT产生效果的具体机理在细胞及分子水平尚缺乏深入探讨。. 通过实验，一方面，印证了我们关于“NPWT和CFMD可以在缺血性创面的治疗上产生较单纯NPWT或NPWT结合生理盐水滴注更好的效果”的设想；并在组织、细胞、分子水平上证实该效果是通过生长因子调控、细胞黏附因子和细胞骨架蛋白变化、细胞外基质合成和降解调节等途径产生的；进一步地，通过细胞和动物实验获得NPWT结合CFMD在负压压力、滴注速度、吸引/释放模式等参数设置上需要考虑的因素和参考值。. 另一方面，由于方法技术的改进，我们在多方面加深了认识。比如，NPWT的海绵敷料除了通过微形变刺激细胞增殖外，其形成的孔洞支架有助于细胞的迁移爬行，这可能是NPWT促肉芽形成的重要机制。又如，培养基滴注速度的提高有助于维持pH、渗透压和乳酸含量等理化性质稳定，加强种植细菌的清除，但培养基滴注过快时最主要不是因为冲刷使细胞脱落而抑制伤口愈合，而是影响了局部的微环境稳定。. 本项目的研究成果从动物实验以及细胞和分子层面证实了NPWT结合CFMD注可以促进缺血创面的愈合，探讨了其机制，并为临床应用提供了在负压压力、滴注速度、吸引/释放模式等参数设置方面的参考。