偶氮氯膦（胂）-稀土螯合物树脂富集分离质谱检测磷酸化蛋白及应用

蛋白质磷酸化是生物体内信号传递的主要方式，磷酸化蛋白的检测、识别和磷酸化位点确定非常重要。实际生物样本中磷酸化蛋白含量低，为提高测定其准确性和灵敏度，磷酸肽高效富集分离成为重要研究课题。根据稀土（III）与磷酸根和胂酸根高选择性稳定配位的性质，提出了合成固定稀土离子（III）的偶氮氯膦（胂）鳌合物树脂及其用于选择性高效富集分离磷酸肽的新方法。采用新的稀土鳌合物树脂，根据磷酸和胂酸及羧酸与稀土离子配合物稳定性不同，通过控制富集和洗脱酸度，不但使磷酸肽高效富集，且肽混合物中的中酸性残基肽段的羧基不与稀土配位和可能存在的胂酸肽也可先洗脱分离， 避免了防止该类肽段因非特异配位的羧基甲酯化操作。探讨不同稀土鳌合物树脂富集磷酸肽的规律，提高磷酸肽富集效率和检测率。溶液脱盐处理后直接进行质谱（MS）或HPLC－MS分析。用于高灵敏检测磷酸化蛋白质和高选择性筛选识别正常和疾病状态下蛋白质磷酸化程度不同。