KIR2DS2和KIR2DL5受体对乙肝患者NK细胞功能的影响及其机制

乙型肝炎病毒（HBV）感染是我国常见的传染性疾病，NK细胞在HBV感染及转归中发挥重要作用，KIR基因家族参与了NK细胞抗病毒免疫应答的调节。前期研究发现KIR2DS2为HBV感染的易感基因，KIR2DL5为保护基因。本课题拟利用SSP-PCR及流式细胞术筛选出不同KIR2DS2和KIR2DL5表型的乙型肝炎患者 NK细胞，检测其KIR2DS2和KIR2DL5表达水平，研究不同KIR表型对NK细胞杀伤活性、细胞因子分泌功能的影响及其受体通路机制；另外选取NK92细胞系，利用RNA干扰及基因转染技术构建不同KIR2DS2和KIR2DL5表型的NK92细胞系，检测不同KIR表型对NK92细胞杀伤活性和细胞因子分泌功能的影响。探讨HBV感染中，KIR2DS2作为易感基因，KID2DL5作为保护基因的潜在细胞和分子机制，为乙肝感染高危人群的筛查和干预提供理论基础。

研究背景：NK细胞在乙型肝炎病毒感染过程中发挥了重要的作用，KIR参与了NK细胞抗病毒免疫应答的调节。前期研究发现KIR2DS2为HBV感染的易感基因，KIR2DL5为保护基因。.目的：探讨KIR2DS2作为易感基因、KIR2DL5作为保护基因的潜在的细胞和分子机制。.方法：1.利用SSP-PCR进行KIR基因分型，筛选不同KIR2DS2、KIR2DL5表型的慢性乙型肝炎感染患者（CHB）组、自限性乙肝患者(SR)组、乙肝疫苗无应答组及健康对照组，并对各组间KIR基因频率进行比较；2.进行KIR基因配体HLA-Cw基因分型分析；3.免疫磁珠法分离CHB、SR组的外周血NK细胞进行培养；4.LDH释放法研究不同KIR表型的NK细胞的杀伤活性，并用单克隆抗体CDl58f封闭处理NK细胞后与体外培养的K562细胞共培养，检测外周血NK细胞对靶细胞的体外杀伤活性；5.用Real-time PCR的方法检测外周血单个核细胞（PBMC）KIR的表达水平。.结果：1.成功筛选出了不同KIR2DS2、KIR2DL5表型的CHB、SR、无应答组及健康对照组；2. 通过SSP-PCR进行KIR基因分型，发现疫苗无应答组KIR3DS1基因的阳性率较健康对照组升高；3. CHB组HLA-Cw03基因的阳性率较健康对照组及疫苗无应答组高，疫苗无应答组HLA-Cw02和HLA-Cw04基因表型频率较健康对照组升高；4.免疫磁珠法分离出CHB、SR组的外周血NK细胞；5.同一个体对K562细胞不同效靶比之间NK细胞的杀伤活性有一定差异，抗CD158f单抗封闭2DL5后，NK细胞对K562细胞的杀伤活性分别均较阻断前降低，CHB 2DL5-组NK细胞对K562细胞的杀伤活性较SR 2DL5+组、SR 2DL5-组低。.结论：1. KIR3DS1基因可能与机体对乙肝疫苗的无应答状态有关；2. HLA-Cw03可能是乙肝持续感染的易感基因，HLA-Cw02和HLA-Cw04可能是下调抗-HBs 应答水平的等位基因；3.同一个体对K562细胞不同效靶比之间NK细胞的杀伤活性有显著性差异；4.NK细胞对靶细胞的杀伤效应与其KIR的基因型、表型均有一定的相关性。