陈蒜中功能性分子降低或消除Cupin超家族致敏原-Ara h1致敏活性的研究

The common way of combating allergy was to avoid contacting with food allergen, but this is not an effective way to solve the problem. With a trace ingested may cause a fatal reaction. According to the hypersensitivity mechanism, based on the preliminary study, .Reduce or eliminate the activity of the major allergen plays a major role in the allergic diseases caused by food. Anti-allergic activity compounds in aged garlic were used as target components, MS, NMR, HMQC, HMBC, and other technologies were used to determine the structure of them；water-soluble CdTe quantum dots were used to mark the allergen；Then the reaction between the activity compound and allergen was studied by fluorescence quenching method. The mechanism was studied by MFS、CD、FTIR spectrometry、XRD、NMR and 3DEMR. Revealed the changes structure and conformation of the modified allergen, and its epitope occupied by the reactive monomer, furthermore, reduced or eliminated the activity of allergen. To establish an independent and innovative anti-allergy method and provide a theoretical basis and applied basic study for the development of low sensitivity or desensitization food.

现有的防治食物过敏的方法大多是避免与致敏原接触，然而这并不是解决问题的有效方式，痕量致敏原的食入有可能会引起致命的反应。本项目针对超敏反应机制，根据前期的研究基础，以食品中主要致敏原的致敏活性降低和消除作为突破口，选择陈蒜中具有抗过敏活性的功能性分子为对象，通过色谱法进行提取得到活性单体，MS,NMR,HMQC,HMBC等技术确定单体化合物结构；利用水溶性CdTe量子点标记致敏原；借助荧光猝灭法研究其对致敏原的修饰作用，采用MFS以及CD等光谱学方法以及FTIR 、XRD、NMR、3D-EMR研究活性单体与致敏原之间作用机制，揭示修饰后的致敏原结构和构象的变化，并确定其被活性单体占据的表位，从分子水平深入研究致敏活性的降低或消除机理。建立自主创新的方法进行抗过敏研究，为降低食品中主要致敏原活性的研究提供理论依据。

本项目针对超敏反应机制，以主要过敏原OVA作为研究对象，从分子角度研究活性小分子降低过敏原致敏活性。第一部分，本研究采用色谱法优化陈皮中黄酮类化合物的提取工艺，获得总黄酮；建立OVA诱导的小鼠过敏性哮喘模型，考察总黄酮的抗过敏活性，结果表明，与阳性药物地塞米松相比较，陈皮中总黄酮具有更强的抗过敏活性。进一步采用色谱法分离纯化，得到高纯度的黄酮化合物单体，MS，NMR等技术确定为桔皮素。采用OVA诱导的过敏性哮喘模型考察桔皮素的抗过敏活性，结果表明，与阳性药物地塞米松相比，桔皮素具有较为显著的抗过敏活性。第二部分，当确认了具有抗过敏活性的单体化合物之后，我们采用光谱学方法，包括紫外可见光谱和荧光光谱研究桔皮素与OVA之间是否存在相互作用，结果表明，桔皮素能够使OVA的内源性荧光猝灭，计算了猝灭常数，结合常数，结合位点数，发现桔皮素与OVA之间以形成静态复合物的形式发生作用，通过热力学参数的计算，判断了作用力类型为静电作用为主，采用了同步荧光扫描技术以及三维荧光光谱判断了桔皮素对OVA构象的影响，最后我们运用了分子对接技术模拟了桔皮素与OVA之间的相互作用机制。以上的研究工作表明，陈皮总黄酮和桔皮素具有抗OVA诱导的BALB/c小鼠过敏性哮喘的活性，并且活性显著高于阳性药物地塞米松，我们以光谱化学为研究手段，从分子角度研究了桔皮素与OVA之间的相互作用，从分子角度考察桔皮素是否能够降低致敏原的过敏活性，结果表明，桔皮素能够与OVA之间形成静态复合物，并对蛋白质的构象产生了影响。