中药复方多糖的分离纯化及其免疫调节活性的研究

研究既安全又有效的免疫增强剂是迫切需要解决的问题，中药多糖最突出的活性作用为免疫增强作用，目前国内外对中药多糖免疫活性的研究主要集中在单味中药多糖，对复方中药多糖系统研究国内外还未见报道。本项目从新疆特色中药配伍成的免疫增强剂（2005年获新疆兵团科技进步二等奖）中分离纯化多糖，得到不同分子量、不同纯度多糖，进行不同纯度多糖免疫活性检测，筛选最佳纯度活性多糖，研究其免疫作用机制，制定质量控制标准并进行结构分析及毒性、稳定性评价，观察最佳纯度活性多糖以不同剂量、不同剂型、不同给药途径对鸡免疫调节作用影响，并以单味中药多糖和左旋咪唑作对比，筛选出免疫效果最为显著的最佳纯度多糖的最佳剂量、最佳剂型、最佳给药途径，为阐释复方多糖效果是否优于单味中药多糖，复方多糖经纯化后还有无作用，是否纯度越纯效果越好，是否使用剂量越大效果越好提供理论依据，为中药复方多糖作为畜禽疫苗开发利用提供技术支撑。

（一）中药复方免疫增强剂中多糖的提取和中药复方多糖的分离纯化　　采用水提醇沉法,从中药复方免疫增强剂中获得粗多糖提取物即中药复方总多糖，中药复方总多糖经不同浓度乙醇分级后，得到A1、A2、A3三个组分，A1、A2、A3组分经大孔树脂纯化后得到B1、B2、B3三种不同纯度的多糖。多糖含量分别达64.7%、77.1%、79.8%。.　　（二）不同组分、不同纯度多糖对小鼠免疫活性研究　　A2组分和B2纯度多糖能提高小鼠许多免疫学指标。B2纯度多糖免疫活性最为显著，为最佳纯度多糖。.　　（三）中药复方总多糖对小鼠免疫活性作用机制研究　　中药复方总多糖对巨噬细胞NO的生成具有促进作用，能显著促进小鼠IL-2mRNA的表达,mRNA差异显示技术可简捷、快速地筛选出口服中药复方总多糖、黄芪多糖后小鼠差异表达的基因。.　　（四）多糖的纯度鉴定　　多糖B2经凝胶色谱分离得到多糖 B2-1、B2-2、B2-3，运用凝胶色谱法、纸色谱法检测多糖B2-1、B2-2、B2-3均为均一组分，运用紫外分光光度法进行检测，三种多糖均不含有核酸和蛋白质。通过小鼠免疫调节活性作用研究，多糖均一组分B2-2免疫调节活性好，多糖均一组分B2-1、B2-3无免疫调节活性。.　　（五）多糖的结构分析　　应用紫外光谱、红外光谱、1H核磁共振谱和13C核磁共振谱研究了最佳纯度多糖的结构，明确了其结构。.　　（六）多糖B2质量监控　　从多糖B2制法、性状、酸度、薄层色谱定性鉴别、多糖含量测定、其它检验（蛋白质检验 、鞣质检验 ）制定了多糖B2质量控制标准（草案）。 .　　（七）多糖B2对鸡免疫调节作用的影响　　筛选出了对鸡免疫调节作用最为显著的最佳纯度多糖的最佳剂量、最佳剂型、最佳给药途径。.　　（八）多糖B2毒性、稳定性评价　　多糖B2无毒性，无蓄积毒性作用。多糖B2热原符合规定，性质稳定。.　　科学意义：项目研究揭示了一定纯度中药复方多糖的免疫调节活性优于中药复方多糖提取物，并非多糖纯度越高免疫调节活性越好；揭示了一定纯度中药复方多糖免疫调节活性不是剂量越大效果越好。