地西他滨诱导人调节性gammadeltaT细胞Foxp3基因表达上调的分子机制研究

Application of clinically available drugs to treatment of autoimmune diseases and transplation has brilliant perspectives. In a previous study, we established a valid experimental system by using DNA-demethylation agent decitabine to activate human regulatory gammadelta T cells, revealing the immunoregulatory features of decitabine. There are NFAT-dependent and independent pathways involved in Foxp3 up-regulation. However, the molecular mechanisms by which decitaine regulates activation of human regulatory T cells are largely unknown. In this research, based on previous results, we would investigate the expression of NFAT-pathway related molecules by RT-PCR, flow cytometry, gene chip and co-immnoprecipitation, to clarify the molecular mechanisms regulating decitabine-induced regulatory T cell activation. Through this research, we would provide theoretical basis and experimental evidence for decitabine-based immunoregulatory therapy, to explore new application of clinically available drugs and enrich therapeutical intervention strategies for autoimmune diseases and transplantation.

采用现有临床适用药物干预自身免疫性疾病和移植免疫具有广阔的前景。课题前期研究建立了临床用DNA去甲基化药物地西他滨活化人调节性gammadeltaT细胞的方案，通过动物实验证实其免疫抑制活性。地西他滨诱导活化的这群调节性T细胞内Foxp3表达上调，相关分子机制尚不清楚。前期研究结果表明T细胞内转录因子NFAT依赖性信号通路与Foxp3表达密切相关。本研究拟在已有研究基础上，通过体外活化人外周血来源的调节性gammadeltaT细胞，采用流式细胞技术、RT-PCR、甲基化基因芯片和免疫共沉淀等技术，检测调节性T细胞中NFAT信号通路相关分子表达水平，从基因、蛋白质和分子表型等多层面探索NFAT介导的地西他滨诱导人调节性T细胞Foxp3表达的分子机制。本研究将为应用临床适用药物地西他滨介导进行免疫调节奠定理论基础和提供实验依据，通过发掘现有临床药物新的适应症，丰富自身免疫调节治疗的临床策略。

研究背景：采用现有临床适用药物干预自身免疫性疾病和移植免疫具有广阔的前景。本课题前期研究建立了临床用DNA去甲基化药物地西他滨活化人调节性γδT细胞的方案。地西他滨诱导活化的这群调节性T细胞内Foxp3表达上调的相关分子机制尚不清楚。..研究方法：本研究拟在已有研究基础上，通过体外活化人外周血来源的调节性γδT细胞，采用流式细胞技术、RT-PCR、甲基化基因芯片和免疫共沉淀等技术，检测调节性T细胞中NFAT信号通路相关分子表达水平，从基因、蛋白质和分子表型等多层面探索NFAT介导的地西他滨诱导人调节性T细胞Foxp3表达的分子机制。..重要结果：（1）本研究采用方案获得Foxp3表达阳性调节性γδT细胞，最高可占T细胞的75%，实现预期结果。（2）本研究同时建立了体外扩增γδT细胞的药物组合及其扩增方法。通过临床药物来那度胺、泊马度胺分别与唑来膦酸进行组合，扩增细胞毒性γδT细胞。（3）地西他滨作用前后Foxp3基因的甲基化程度均有所降低，提示地西他滨可直接作用于Foxp3基因的相关区域，促进Foxp3基因表达上调，触发下游基因转录和信号分子活化。（4）地西他滨诱导后与Foxp3基因表达相关的转录因子NF-kB表达上调，提示地西他滨可通过上调NF-kB活性间接促进Foxp3基因表达活化。..研究意义：本研究明确了地西他滨诱导外周血调节性γδT细胞免疫调节功能的分子机制，为应用临床适用药物地西他滨介导进行免疫调节奠定理论基础和提供实验依据，通过发掘现有临床药物新的适应症，丰富自身免疫调节治疗的临床策略。..课题成果：课题组共发表研究论文5篇，其中1篇第一作者中文核心期刊论文，3篇SCI收录论文。SCI收录论文中，第一作者/并列第一作者SCI论文1篇（影响因子6.6），共同作者SCI论文2篇（影响因子2.5）。共参加国内、国际学术会议5次，其中，在国内会议中做大会发言2次；国际会议中做大会发言2次，壁报1次。注重知识产权保护，已提交国内发明专利申请2项。通过本课题培养北京市医管局青苗人才1名，博士研究生1名，硕士研究生1名。出版（主审）科普著作1部。