miR-96在耳蜗声损伤中对毛细胞功能维持及细胞凋亡的调控作用及机制

miR-96在内耳毛细胞的发育、分化及功能维持方面起着决定性的调控作用。我们在体外试验中发现：miR-96参与调控了过氧化氢诱发的耳蜗毛细胞的凋亡，但其在耳蜗声损伤中如何调控毛细胞死亡尚不清楚。本项目拟利用大鼠噪声性聋模型，首先合成miR-96及其反义寡核苷酸序列、构建表达载体，体内、体外条件下导入耳蜗细胞内，RT-PCR检测分析其表达改变；然后检测噪声暴露后耳蜗毛细胞脂质膜完整性、对ROS损伤敏感性变化并计数损伤毛细胞数目，分析miR-96表达改变与毛细胞损伤改变的相关性；再通过检测caspase-3、BAX等相关基因及蛋白的表达变化以及miR-182、183表达变化，探讨耳蜗声损伤中，miRNA对毛细胞功能维持及细胞凋亡的调控作用及可能的分子机制。旨在进一步从miRNA水平明确噪声致聋分子机制，并探讨在转录水平利用干预miRNAs表达、调控mRNAs防治噪声性聋的可能性。

本研究利用110dB白噪声持续暴露大鼠10h，成功建立噪声性聋大鼠模型；并在前期研究基础上，改进了内耳给药的方法和途径-经底回鼓阶-后半规管途径及上鼓室-听骨链-镫骨环韧带途径，均取得了良好的效果；利用慢病毒携带rno-miR-96上鼓室-听骨链-镫骨环韧带途径导入内耳后，miR-96在内耳中获得良好表达；实验耳与对照耳比较，噪声暴露后24h毛细胞计数及ABR阈值实验组毛细胞损伤数目少于对照耳（p<0.05），噪声暴露后7d，实验耳与对照耳比较，毛细胞损伤数目及ABR阈值改善均明显优于对照耳（p<0.05）;miR-96过表达后，与对照耳比较，实验耳中BAX及caspase3、8表达均明显降低；结果提示miR-96过表达后，可能通过调控BAX及caspase3、8途径调控毛细胞凋亡。