染料与八元瓜环自组装型分子信标

分子信标(MB)是基于荧光能量转移原理设计的发夹型寡聚核酸荧光探针，已经成为分子生物学中强有力的研究工具。但细胞内核酸酶切会导致假阳性信号，并且MB自身背景荧光也会干扰检测灵敏度，现有的方法都不能同时解决上述问题。本申请首次提出将苯酚引入到MB荧光信号团的末端，将甲基紫晶(MV2+)引入到荧光淬灭团末端，八元瓜环(CB[8])与苯酚和MV2+的自组装可将MB荧光团和淬灭团在底部"锁紧"，让彼此充分靠近，最大限度消除背景荧光，提高检测灵敏度。即使发生核酸酶降解，荧光团和淬灭团仍被CB[8]"锁定"，不产生假阳性信号。MB与靶核酸作用后，在体系中加入等当量的2，6-二羟基萘（络合常数是苯酚的260倍）置换CB[8]中的苯酚客体，使其从CB[8]中脱出，荧光团远离淬灭团，发出荧光信号。该类染料与CB[8]自组装型MB既可避免核酸酶切导致的假阳性又可提高检测灵敏度，为MB性能优化提供新思路。

分子信标(MB)是基于荧光能量转移原理设计的发夹型寡聚核酸荧光探针，已经成为分子生物学中强有力的研究工具。但细胞内核酸酶切会导致假阳性信号，并且MB 自身背景荧光也会干扰检测灵敏度，现有的方法都不能同时解决上述问题。本申请首次提出将苯酚引入到MB荧光信号团的末端，将甲基紫晶(MV2+)引入到荧光淬灭团末端，八元瓜环(CB[8])与苯酚和MV2+的自组装可将MB 荧光团和淬灭团在底部“锁紧”，让彼此充分靠近，最大限度消除背景荧光，提高检测灵敏度。即使发生核酸酶降解，荧光团和淬灭团仍被CB[8]“锁定”，不产生假阳性信号。MB 与靶核酸作用后，在体系中加入等当量的2，6-二羟基萘（络合常数是苯酚的260 倍）置换CB[8]中的苯酚客体，使其从CB[8]中脱出，荧光团远离淬灭团，发出荧光信号。该类染料与CB[8]自组装型MB 既可避免核酸酶切导致的假阳性又可提高检测灵敏度，为MB 性能优化提供新思路。