MT-12对膀胱癌细胞侵袭和转移的影响及机制

Bladder cancer is the most common urinary tract tumors. Membrane toxin 12 (MT-12), isolated from Naja naja atra, can inhibite cytoactive of various cancer cells. In our previous study, we found that MT-12 play roles in tumor evalution, and they involve in tumor cell proliferation and metastasis. The influence of MT-12 in bladder cancer cells will be identified. Invasion chamber, adhesion experiment, scratch test and flow cytometry experiments will be used to identify the effects of the MT-12, including cell proliferation ability, invasion, metastasis and apoptosis. The influence of signaling pathways will be identified by Western blot and immunofluorescence methods.Effect of the MT-12 on tumorigenic ability of bladder cancer cells will be observed by nude mouse bladder orthotopic implantation model.This study was designed to study the anticancer effect of MT-12 and to evaluate its latent energy in prevention and clinical application of human bladder cancer.

膀胱癌是我国最常见的肿瘤，越来越多的研究证实MT-12对体内外肿瘤有选择性杀伤作用，对正常细胞的杀伤作用较小，且对多种癌细胞均有明显的抑制作用。本课题组前期研究发现MT-12对膀胱癌细胞生长增殖的抑制作用呈现明显的浓度依赖性，且对正常尿路上皮无明显损伤的前提下，MT-12使膀胱癌细胞EJ的侵袭能力降低。本项目在前期实验基础上，进一步研究MT-12的抑瘤作用，研究MT-12对膀胱癌细胞增殖、侵袭、粘附和迁移能力以及细胞凋亡、细胞周期的影响，明确MT-12对膀胱癌细胞生长、粘附、侵袭和转移相关因子表达的影响，探讨其可能的机制。明确MT-12灌注裸鼠膀胱对抑制膀胱癌细胞腔内增殖、侵袭的效果，评估MT-12应用于预防和治疗膀胱癌的临床前景。

膀胱癌是泌尿系统的常见肿瘤，具有时间上及空间上多发性的特点，因而探寻抑制膀胱癌侵袭转移的药物是膀胱癌研究的重要方向。MT-12是中华眼镜蛇毒中重要的活性多肽，研究表明，MT对肿瘤有选择性的杀伤作用。本研究在细胞及动物水平，对MT-12抑制膀胱癌细胞的作用及分子机制进行了探究。课题组选取T24及RT4两株膀胱癌细胞进行试验，首先在细胞水平检测了MT-12对膀胱癌细胞增殖，迁移，黏附能力的影响，结果表明MT-12在0.25μg/mL，0.5μg/mL浓度时，对膀胱癌细胞的增殖，迁移，黏附能力有明显抑制作用。进而我们对MT-12抑瘤作用的具体分子机制进行探索。在探索MT-12抑制膀胱癌细胞增殖的机制研究中我们发现，0.5μg/mL MT-12作用后，在显著促进了膀胱癌细胞发生凋亡的同时，细胞自噬水平也明显上调，且对细胞自噬抑制后，MT-12的抑癌作用同样受到抑制，提示我们MT-12诱导膀胱癌细胞发生了自噬性的死亡。同时，研究对MT-12抑制膀胱癌细胞侵袭转移的分子机制进行探索，结果表明MT-12抑制了肿瘤血管新生相关因子 MMP-9的活性， VEGF，ICAM-1的表达，提示我们抑制血管新生在MT-12抑制膀胱癌细胞侵袭转移的作用中有重要作用。最后课题组在膀胱肿瘤裸鼠成瘤模型上进一步明确了MT-12对膀胱癌细胞成瘤的抑制作用，且瘤体中caspase-3，VEGF,ICAM-1的表达也显著受到抑制。综上所述，本研究证实了MT-12对膀胱癌的增殖，侵袭能力有显著抑制作用，且其分子机制涉及促进细胞凋亡，自噬性死亡及抑制肿瘤血管新生。该研究为MT-12应用于膀胱癌治疗及寻找新的药物治疗靶点打下了坚实基础，且为认识膀胱癌发生发展过程中的机制提供了启示性线索。