一个功能未知的LncRNA uc.187调控滋养细胞侵袭力的作用机制研究

LncRNA uc.187 is a highly conserved lncRNA, identified from placentas trophoblast cells of patients with preeclampsia by differential lncRNA expression profile. Our previous study revealed that lncRNA uc.187 could affect the invasiveness of human trophoblast cells. Bioinformatic analysis and experiments suggested that TFAP2A was its candidate target gene. Based on these data, we will investigate the expression characteristics and influencing factors of lncRNA uc.187. Adopting overexpression and knock down strategies in vitro and in vivo , we intend to explicit the function and mechanism of lncRNA uc.187 in trophoblast cells invasion dysregulation in preeclampsia pathogenesis. So far there is no report of lncRNA uc.187 in preeclampsia pathogenesis, and it may provide new intervention targets for prevention of preeclampsia.

uc.187是我们通过芯片技术筛选获得的、人鼠高度同源、差异高表达于子痫前期患者胎盘滋养细胞中、功能未知的lncRNA。前期发现，uc.187过表达显著降低滋养细胞侵袭力；软件分析与实验证实TFAP2A为其作用靶点；而文献报道TFAP2A与滋养细胞侵袭力、子痫前期发生密切相关，提示uc.187可能通过调控TFAP2A的机制影响滋养细胞侵袭力、在子痫前期发病中发挥作用。研究拟：临床评估uc.187表达与滋养细胞侵袭力、子痫前期的关系；分析uc.187的表达特征和影响因素；应用过表达、基因沉默技术，在细胞与在体水平，明确uc.187调控滋养细胞侵袭力致子痫前期发生的作用；以TFAP2A为机制线索，通过挽救实验，论证uc.187调控滋养细胞侵袭力致子痫前期发生的机制。uc.187功能与机制未见报道，研究可能为子痫前期防治提供新靶点。

项目的背景：滋养细胞侵袭能力不足和胎盘浅植入是子痫前期（PE）发病的重要原因。长链非编码RNA（Long non coding RNAs ，lncRNAs）uc.187是从PE患者的胎盘组织中高度表达的超保守区域转录而来，它已被证实与异常滋养层细胞侵袭力有关。本文主要通过实验来证明uc.187与PE的关系及探索其发病机制，并尝试从中找到治疗PE的新靶标。.主要研究内容：我们使用芯片技术对胎盘的原代滋养细胞差异lncRNA进行筛选，构建uc.187慢病毒沉默载体、慢病毒HBLV-LncRNA uc.187-GFP-PURO,并以HBLV-GFP-PURO作为对照组，生理盐水作为正常组，在HTR-8 / SVneo细胞上进行细胞实验并用尾静脉注射方法进行动物实验。同时我们建立了由脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）诱导的PE大鼠模型来验证uc.187在孕鼠中的表达情况。我们还收集了PE孕妇、胎儿生长受限孕妇的胎盘及其对应的未早产孕妇胎盘、胎盘部位滋养细胞肿瘤的绒毛以及对于早期人工流产的绒毛来验证uc.187在滋养细胞侵袭性疾病中的表达差异。最后，我们在HTR-8 / SVneo细胞上通过蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光法来寻找uc.187可能存在的调控机制。.重要结果及关键数据：我们发现lncRNA uc.187在正常妊娠和PE孕妇胎盘组织中存在差异性表达。沉默uc.187后结果表明HTR-8/SVneo细胞侵袭性增强，且蛋白MMP-2和MMP-9上调，TIMP-1下降。同时，过表达uc.187后导致滋养细胞侵袭力下降。uc.187在PE大鼠胎盘中升高，尤其是在妊娠早期并能够持续到妊娠晚期。通过将慢病毒lncRNA uc.187尾静脉注射进妊娠大鼠，成功引起孕鼠母体的高血压症状以及一系列类似人类PE的症状。此外我们的结果还表明，与对照组相比，uc.187在PE和胎儿生长受限胎盘中升高，而在胎盘部位滋养细胞肿瘤中降低。蛋白免疫分析和细胞免疫荧光结果显示，HTR-8/SVneo细胞异常生物学行为可能与β-catenin在胞质胞核中的分布相关。.科学意义：综上所述，我们的研究表明uc.187与滋养细胞侵袭力相关，uc.187过表达能够通过影响β-catenin在胞质胞核中的分布来诱发妊娠大鼠的PE样症状。或许uc.187可以成为PE早期防治和干预的一个新靶标。