C0-029诱导上皮间变促进肝癌侵袭转移的研究

我们前期研究发现四跨膜蛋白CO-029表达可促进肝癌侵袭转移，同时发现其高表达能诱导肝癌发生上皮间质转变（EMT）。在此基础上，本研究拟探讨CO-029可能诱导肝癌上皮间变而促进肿瘤侵袭转移并可能影响预后。本研究应用慢病毒RNA干扰等技术，通过体内外实验对不同转移潜能的肝癌细胞进行分析，并应用组织芯片对大样本肝癌组织标本检测，明确CO-029表达与肝癌转移复发和预后的关系；进而应用免疫共沉淀等技术探讨CO-029可与整合素α6形成复合体并诱导肝癌细胞发生EMT、提高肝癌侵袭性而促进转移；进一步应用信号转导芯片和RNA干扰等技术，通过肝癌裸鼠模型探讨高表达CO-029与α6结合而诱导肝癌EMT的可能信号转导机制。本研究通过探讨CO-029表达与肝癌EMT，复发转移和病人预后间的关系，首次探讨CO-029作为肝癌转移复发或预后预测的可行性，及其诱导EMT而促进肝癌转移的信号机制。

前期研究我们发现四跨膜蛋白CD151与肝癌侵袭转移及术后生存密切相关，其可能的机制是通过α6β1-PI3K信号通路作用诱导肝癌上皮间变（Epithelial mesenchymal transition，EMT）。但是目前文献报道对与CD151密切相关的另一重要四跨膜蛋白Tspan8（又名CO-029）的功能研究尚不清楚。本研究中我们首次在肝癌细胞系（转移潜能依次增强的）和两组432例根治切除术后（Cohort1=80, Cohort 2=352）肝癌中发现四跨膜蛋白Tspan8过表达与肝癌侵袭转移正相关。大样本预后研究我们发现Tspan8高表达组肝癌术后5年生存率（Overall survival, OS）较Tspan8低表达组肝癌显著缩短（P<0.001），同时术后复发时间（Time to recurrence，TTR）相比Tspan8高表达组肝癌较Tspan8低表达组肝癌亦显著缩短（P<0.001）。进一步我们应用RNA干扰技术（RNA interference）行体内外实验研究显示，Tspan8高表达的肝癌细胞MHCC-97H 和对照组MHCC97-H-Mock(LV-GFP)较Tspan8-RNA干扰的MHCC-97H细胞（MHCC97-H-shRNA-Tspan8）在细胞增殖、侵袭能力、成瘤生长及肝癌肺转移等方面明显增强（P<0.05, respectively）。深入机制研究我们发现：在层粘蛋白-5（laminin-5）的诱导下四跨膜蛋白Tspan8 可与整合素α6（integrin α6）结合并诱导高表达肝癌细胞MHCC97-H发生上皮间质转化（EMT），而在RNA干扰组肝癌细胞中（MHCC97-H-shRNA-Tspan8）未见发生，提示Tspan8结合整合素α6后形成复合物可促进肝癌侵袭转移。结论：四跨膜蛋白Tspan8与肝癌侵袭转移正相关，并可能与整合素α6结合而诱导肝癌细胞发生上皮间质转化有关，是肝癌复发转移及预后干预的潜在靶点和分子靶向治疗指标。