MDSCs在血吸虫免疫逃避和宿主免疫调节中的作用与机制

血吸虫病是一种免疫病理性疾病。免疫逃避是虫体在机体内生长发育和致病的前提，免疫抑制是虫体免疫逃避的主要机制之一，宿主免疫调节失衡是免疫病理形成的主要机制。新近发现MDSCs具有强大免疫抑制和免疫调节作用，引发T细胞向Th2方向分化，与肿瘤免疫逃逸、弓形虫等病原体免疫逃避和宿主免疫调节密切相关。我们前期研究发现：血吸虫感染鼠MDSCs较正常鼠明显升高；MDSCs在感染性休克模型免疫抑制和免疫调节中起重要作用。据此推测：MDSCs可能参与血吸虫免疫逃避和宿主免疫调节。我们拟构建血吸虫病小鼠模型，鉴定、分离和分析MDSCs增殖、特性和变化；检测诱导MDSCs增殖的抗原种类；分析各型MDSCs对各期血吸虫病感染鼠CD4+、CD8+、Th1、Th2等细胞的免疫学功能及差异影响；研究MDSCs诱发T细胞分化类型；探讨MDSCs在血吸虫免疫逃避及宿主免疫调节中的作用机制，为血防新药和疫苗研发提供新策略。

构建日本血吸虫病小鼠模型，不同时期采集小鼠骨髓、肝脏、脾脏、外周血，采用流式细胞术分选出MDSCs；结果显示：感染组小鼠血液、骨髓及脾脏的MDSCs在第3、5、7周显著性增多；肝脏中第5周、7周显著增多。分选的MDSCs纯度在99.2%以上；形态学鉴定为幼稚单核细胞和幼稚粒细胞；再根据Gfi1-GFP表达、Gr-1和CD11b表达高低分选出M1、G1、G2、G3四个亚群；纯度在99%以上；四群细胞占MDSCs中百分比依次为：13.25%、4.04%、28.9%、20.95%。形态学检测M1是幼稚单核细胞，为圆形和椭圆形核；G1以环形核幼稚粒细胞为主；G2以环形核和分叶核幼稚粒细胞为主；G3以分叶核和多形核幼稚粒细胞为主。再分别标记CD62L、Ly6C、CD204、CD206、CD80、CD86、TLR4、TLR2、CD124、CD210，经流式细胞术分析M1、G1、G2和G3表型差异，结果显示：G1和G2高表达CD62L和Ly6C，M1和G3高表达Ly6C且部分高表达CD62L，四个亚群均低表达CD204、CD206和TLR2及CD80、CD86和CD124，四个亚群均不表达TLR4和CD210。将从血吸虫病小鼠体内分离的MDSCs及四个亚群细胞分别与CD4+T、CD8+T细胞体外共培养时发现：MDSCs及亚群均可抑制CD4+T和CD8+T细胞的增殖，G2、G3抑制作用最强，且抑制作用随培养体系中MDSCs比例增加而逐渐增强。采用Real-time PCR法检测各亚群IL-4、IL-10、IL-13、TGF-β1、IFN-γ及ArgI、NOS2的RNA表达水平，发现G2表达IL-4和IL-10较高， G3表达IL-10和IFN-γ量较高，证明G2、G3可能通过分泌上述CKs参与免疫抑制效用；四个亚群均未检测到ArgI表达。在NOS、NOS2、ArgІ抑制剂阻断实验时发现：三种抑制剂均不能阻断G2和G3对CD4+T、CD8+T细胞增殖的抑制作用，表明G2和G3免疫抑制机制可能与NOS2和ArgІ无关。本研究证实MDSCs是血吸虫感染小鼠体内的一种免疫调节细胞，参与血吸虫与宿主间的免疫调节作用，其分子机制可能与IL-4、IL-10、IFN-γ有关，与NOS2和ArgІ无关，但其确切机制尚需进一步研究和探讨。