当归补血汤选择性调控内皮细胞VEGFR/sVEGFR表达而双向调节血管生成的研究

"双向调节"是中医药防治疾病的重要机制。课题组前期研究显示当归补血汤均能增加肿瘤及缺血周围心肌VEGF表达，但产生抑制（肿瘤）和促进（缺血心肌）血管生成的双向作用，其机制值得深入探究。本研究以血管内皮细胞异质性（主要不同疾病状态下、不同组织血管内皮细胞VEGF受体表达不同）为切入点，以心肌缺血和肿瘤大鼠模型为载体，采用①免疫组化（观察MVD）；②HE染色、银染法、电镜（检测血管及血管内皮细胞形态结构），③QT-PCR、western-blot（检测生长因子、不同类型受体、GM-CSF mRNA及蛋白表达）等方法，综合考察不同疾病状态下当归补血汤对不同组织血管内皮细胞VEGFR/sVEGFR表达的影响，揭示不同疾病状态下当归补血汤促进/抑制血管生成的作用机制，研究结果将有利于丰富中药双向调节理论科学内涵，为众多方药双向调节作用的研究提供借鉴和参考，为当归补血汤的临床合理应用提供科学实验依据。

本研究以血管内皮细胞异质性（主要不同疾病状态下、不同组织血管内皮细胞VEGF受体表达不同）为切入点，通过离体和在体两方面实验研究，探讨当归补血汤双向调节血管生成机制。实验建立了缺氧血管内皮细胞（EA.hy926）模型（以下简称缺氧模型）及与肿瘤（A549）共培养血管内皮细胞（EA.hy926）模型（以下简称共培养模型），通过CCK-8法观察缺氧血管内皮细胞及与肿瘤共培养血管内皮细胞的增殖作用；通过ELISA法检测缺氧血管内皮细胞及与肿瘤共培养血管内皮细胞VEGF及其受体（VEGFR1、VEGFR2、sVEGFR1、sVEGFR2）的表达。复制了心肌缺血和肿瘤大鼠模型，通过检测大鼠心功能，肿瘤生长情况，免疫组化观察缺血心肌和肿瘤新生血管密度（MVD），QT-PCR、western-blot检测生长因子、不同类型受体、GM-CSF mRNA及蛋白表达。离体实验结果显示当归补血汤能够促进缺氧血管内皮细胞的增殖，抑制与肿瘤共培养血管内皮细胞的增殖，对不同状态血管内皮细胞增殖呈现双向调节作用，其机制为当归补血汤虽能促进不同状态血管内皮细胞VEGF的表达，但可选择性调控不同状态血管内皮细胞VEGF受体（VEGFR/sVEGFR）的表达。在体实验结果显示当归补血汤能改善心肌缺血大鼠心功能，增强化疗药物抑瘤作用，增加缺血心肌微血管密度和VEGF的表达，抑制肿瘤组织的微血管密度和VEGF的表达，诱导缺血心肌VEGFR1、VEGFR2的表达而抑制sVEGFR1、sVEGFR2的表达。通过本实验可以说明当归补血汤对不同疾病状态下的血管新生有双向调节作用，其机制可能与其促进血管内皮细胞分泌VEGF无关，而与其选择性调控VEGF与其不同受体的结合有关，揭示了不同疾病状态下当归补血汤促进/抑制血管生成的作用机制，研究结果有利于丰富中药双向调节理论科学内涵，为众多方药双向调节作用的研究提供借鉴和参考，为当归补血汤的临床合理应用提供科学实验依据。