大鼠急性高眼压视网膜大胶质细胞死亡的RIPK-3通路及其调控机制研究

前期研究发现大鼠急性高眼压1天时部分视网膜大胶质细胞出现死亡，但机制不明。视网膜基因芯片、RT-PCR等显示该模型条件下视网膜中部分大胶质细胞RIPK-3表达上调。鉴于RIPK-3- - -代谢紊乱- - -ROS聚集是非Caspase-依赖性细胞死亡的重要通路并受Caspase-8剪切调控，我们推测急性高眼压早期视网膜大胶质细胞的死亡可能由RIPK-3介导并受Caspase-8调控。为证明该假设，我们拟通过体内和体外实验探索RIPK-3通路在急性高眼压后大胶质细胞凋亡过程中的作用，继而探索Caspase-8对RIPK-3的剪切调控作用。本项目以急性高眼压视网膜大胶质细胞存亡的分子机制为突破口，有利于进一步探索视网膜大胶质细胞对节细胞死亡的影响，为青光眼病程中保护受损的大胶质细胞，继而保护节细胞提供理论和实验依据。

RIP3是具有特异丝氨酸/苏氨酸激酶活性的一类蛋白，其能够感受细胞内环境的变化从而调控细胞的坏死，急性高眼压1天时部分视网膜大胶质细胞出现坏死，因此保护损伤的胶质细胞进而保护神经元成为我们研究的重点。为了解决这一问题，我们首先对RIP3在大鼠视网膜内的表达分布进行了研究，结果发现RIP3主要表达在视网膜内层神经元中，包括大部分的节细胞以及少部分的水平细胞和无长突细胞，只有部分胶质细胞中有所表达，且未在其他类型的细胞中发现明显表达。这使得我们更多地将目光聚焦到眼高压1天之后节细胞的坏死上来，为了进一步研究其坏死机制，我们运用免疫荧光与western blot等方法检测了急性眼高压后大鼠视网膜RIP3的表达变化，结果发现，急性高眼压后1天视网膜节细胞RIP3分布规律未见明显变化，但其表达量显著上调，进一步研究发现RIP3上调的部分节细胞中有存在坏死，RIP3的表达上调与节细胞的坏死密切相关。利用离体条件下加压损伤研究程序性坏死可能分子机制，同样发现RIP3在此细胞系高压损伤导致的程序性坏死中发挥作用，并且发现除了RIP3在次过程中起作用之外，calpain也在此细胞系中介导程序性坏死，这很大程度的丰富了程序性坏死的机制研究。