银杏内酯B对脑缺血后神经干细胞增殖、分化及迁移的影响及机制研究

银杏内酯B可以拮抗脑缺血性损伤而发挥其神经保护作用。脑缺血后内源性神经干细胞（NSCs）增殖、迁移到损伤区域，并分化成为成熟神经元，部分替代损伤或死亡的细胞，参与神经功能的修复。但是，银杏内酯Ｂ治疗脑缺血性疾病的过程中，其对NSCs增殖、分化及迁移的影响及机制尚不甚清楚。本项目将建立局灶性脑缺血再灌注和体外培养NSCs缺氧诱导模型，研究银杏内酯B对两种模型NSCs增殖、分化及迁移的特点和时空规律的影响及其作用机制。阐明银杏内酯B是否通过细胞因子途径、Id2途径、SOCS2途径或同时通过多种途径协同作用影响NSCs的增殖和分化；也阐明银杏内酯B是否通过SDF-1途径或Reelin途径影响NSCs的迁移。本课题结合在体离体模型，进行多靶点及动态的研究。研究结果将揭示银杏内酯B神经保护作用的神经干细胞途径，为临床利用银杏内酯B治疗缺血性脑血管疾病提供更加科学的理论依据。

目的：探讨银杏内酯B在脑缺血模型中促进神经干细胞增殖分化及其可能机制。.方法：(1)建立缺氧神经干细胞培养模型，在造模成功后3天、7天、14天各时间点，相差显微镜下观察模型组，20mg/l GKB、40mg/l GKB、60mg/l GKB各组神经干细胞胞体和突起的变化情况；免疫荧光细胞化学染色观察各组神经干细胞分化为神经元(NSE)、星形胶质细胞(GFAP)的阳性细胞表达情况及可能机制(SOCS2)。(2)建立大鼠局灶脑缺血模型，在造模成功后3天、7天、14天各时间点，神经功能损伤评分观察假手术组、模型组、治疗组各组神经功能评分情况；免疫组化法观察各组Nestin (神经干细胞)、NSE (神经元细胞)、GFAP (星形胶质细胞)和BrdU的蛋白表达变化情况；RT-qPCR法观察各组BDNF、EGF的基因表达变化情况；Western Blot法观察各组BDNF、SOCS2蛋白表达变化情况。.结果：(1)在缺氧神经干细胞模型中，GKB治疗组较模型组的细胞突起和胞体面积均显著增快，其中中高剂量组较低剂量组增快更明显；GKB治疗组较模型组NSE、GFAP、SOCS2阳性细胞表达均显著增多。(2)在大鼠局灶脑缺血模型中，治疗组较模型组神经功能损伤评分显著下降；免疫组化观察各时间点，模型组较假手术组Nestin、NSE、GFAP、SOCS2阳性细胞表达均显著增多，而治疗组较模型组增多更明显；RT-qPCR法观察各时间点，7天和14天的治疗组较模型组BDNF和EGF基因表达显著增加；Western Blot法观察各时间点，治疗组较模型组BDNF和SOCS2蛋白表达显著增加。.结论：银杏内酯B在脑缺血模型中能促进神经干细胞的增殖和分化，增加神经干细胞向神经元分化的比例，从而改善脑缺血预后。其作用可能与活化内源性BDNF、EGF因子的表达，增加信号通路抑制因子SOCS2的表达有关。