幽门螺杆菌感染诱导巨噬细胞分化及功能的研究

幽门螺杆菌（H.pylori，Hp）感染率高，其长期定植及导致不同临床结局的机制都还不清楚。巨噬细胞（Mφ）密切参与Hp感染过程，却不能有效将其清除。Mφ不同表型和功能亚群的存在提示我们需重新认识其在Hp感染中的分化。组织蛋白酶X（CTSX）在Hp感染及胃癌的Mφ中高表达，但机制不明；具M2型Mφ分化诱导作用的IL-4能增强Mφ中CTSX表达及活性。我们发现用Hp感染胃上皮细胞的培养滤液与具M1型Mφ诱导作用的TNF-α分别刺激Mφ，其细胞因子及CTSX表达水平不同。因此推测Hp感染后Mφ向M2型分化，并通过CTSX促进肿瘤进展。于是我们建立不同cagA及vacA基因型的Hp临床分离株感染的胃上皮细胞与Mφ共培养体系，研究Mφ表型及功能的改变，明确其分化方向，进而观察Mφ对肿瘤细胞功能的影响；通过过表达、抑制酶活性或RNA干扰，观察CTSX在其中的作用，为Hp感染及胃癌的机制研究提供思路。

巨噬细胞密切参与幽门螺杆菌（H.pylori）感染过程，却不能将其有效清除。不同表型和功能的巨噬细胞亚群的存在提示我们必须重新认识其在H.pylori感染过程中的分化情况。为探讨H.pylori感染后巨噬细胞是否被诱导向M2型巨噬细胞分化，其中组织蛋白酶CTSX表达改变是否是分化中的巨噬细胞促进肿瘤形成的因素，本课题首先从分离H.pylori临床株并进行CagA、VacA分型鉴定，然后分别用人外周血单核细胞及人单核细胞株Thp-1诱导分化成M1型、M2型巨噬细胞，建立了H.pylori感染的人胃上皮细胞AGS和GES-1与巨噬细胞共培养体系，简易模拟H.pylori体内感染的发生。通过分析巨噬细胞形态、表型改变及分泌细胞因子功能变化、CTSX表达水平改变，可以得到初步结果：首先，在人外周血单核细胞分别用GM-CSF和M-CSF向M1和M2型巨噬细胞诱导过程中加入经H.pylori感染的胃上皮细胞培养上清后，细胞在生长方式及形态上都有明显差别，提示幽门螺杆菌可能在其中起了一定的作用；检测了相应处理后巨噬细胞的表型后发现与AGS的感染上清共培养后的M1型巨噬细胞HLA-DR及CD68的表达明显高于与GES-1的感染上清共培养的M1型巨噬细胞。在诱导分化的M1、M2巨噬细胞中，M2的CTSX表达水平略高于M1，脂多糖LPS刺激后CTSX没有明显的表达增加；而在M1型巨噬细胞诱导培养的第二天开始加入经各种不同临床株H.pylori感染的胃上皮细胞GES-1培养上清后，CTSX的表达有不同程度的增加，推测有可能使巨噬细胞向高表达CTSX的M2型转化。巨噬细胞的转染和干扰较困难，目前正在尝试构建慢病毒转染体系，因此对CTSX的抑制性试验还在进行中。综合以上结果，H.pylori感染对巨噬细胞的表型及功能有一定影响，有促使巨噬细胞向M2型分化的趋向，但CTSX在其中的作用还有待进一步研究。这对H.pylori感染引起机体巨噬细胞免疫失调提供了一些新的思路。