粉防己碱干预增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β/Smad信号转导通路的分子机制研究

近期研究表明TGF-β/Smad信号转导通路异常活化是瘢痕过度增生的关键因素。在本课题组前期研究已证实粉防己碱可有效抑制增生性瘢痕来源成纤维细胞增殖和胶原合成的基础上，本项目以TGF-β/Smad信号转导通路为主线，综合应用RNAi干涉技术、RT-PCR、Western blot、流式细胞检测和免疫细胞化学及瘢痕成纤维细胞体外培养等方法，系统观察粉防己碱对增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β/Smad信号转导通路的干预作用，并采用基因芯片技术筛选粉防己碱干预前后瘢痕成纤维细胞差异表达基因，探讨粉防己碱干预后基因表达谱与TGF-β/Smad信号转导通路和胶原代谢变化的相关性及与其它相关通路信号串话的变化。旨在深入阐明粉防己碱抗瘢痕增生的分子机制，起到提纲挈领、执简驭繁的作用，为增生性瘢痕防治提供新思路，为进一步临床应用提供理论依据和实验基础，并推动包括瘢痕在内的纤维化性疾病发病和调控机制的再认识。

近期研究表明TGF-β/Smad 信号转导通路异常活化是瘢痕过度增生的关键因素。在本课题组前期研究已证实粉防己碱可有效抑制增生性瘢痕来源成纤维细胞增殖和胶原合成的基础上，本项目以TGF-β/Smad 信号转导通路为主线，综合应用RNAi 干涉技术、RT-PCR、Western blot、流式细胞检测和免疫细胞化学及瘢痕成纤维细胞体外培养等方法，系统观察粉防己碱对增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β/Smad 信号转导通路的干预作用，并采用基因芯片技术筛选粉防己碱干预前后瘢痕成纤维细胞差异表达基因，探讨粉防己碱干预后基因表达谱与TGF-β/Smad 信号转导通路和胶原代谢变化的相关性及其变化。研究结果显示，粉防己碱部分通过诱导增生性瘢痕成纤维细胞Smad7表达上调和Smad2下调从而阻断下游信号通路传导来发挥其抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原过度沉积效应。同时，粉防己碱干预后增生性瘢痕成纤维细胞基因表达谱有明显变化，涉及TGF-β信号通路、Toll样受体通路、PPAR信号通路、Wnt信号通路、MAPK信号通路、mTOR信号通路以及p53信号通路等，表明该药具有多途径与多靶点的作用特点，也进一步证实瘢痕形成中信号通路网络化和复杂性。另外，粉防己碱对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞微小RNA的表达也具有调控作用，可能是其抗瘢痕增生效应的另一重要途径。研究结果为增生性瘢痕防治提供了新思路，为进一步临床应用提供了理论依据和实验基础。