Ag@SiO2核壳结构上水溶性共轭聚合物的表面增强荧光共振能量转移和肿瘤标志物检测研究

水溶性共轭聚合物已广泛用于生物检测与成像。本项目将水溶性共轭聚合物与金属增强荧光相结合，以肿瘤标志物检测为目标。在纳米银二氧化硅核壳结构上连接肿瘤标志物的单克隆抗体，加入待测抗原，用另一染料标记的肿瘤标志物单克隆抗体作为信号探针，形成"三明治"结构的肿瘤标志物抗原的检测方法。检测金属增强的染料荧光，加入水溶性共轭高分子后，水溶性共轭高分子主要利用静电作用力与Ag@SiO2纳米复合粒子上键合的抗体待测抗原和信号抗体相互作用产生金属增强的F?ster共振能量转移信号来检测待测抗原，实现肿瘤标志物的放大检测。通过改变核壳的厚度、肿瘤标志物抗体的固定密度、合理选择染料和水溶性共轭聚合物提高检测的灵敏度。本项目的实现可以为常见肿瘤的预防、筛查和早期诊断提供一种可能的灵敏、安全、稳定的检测新途径，为人类健康作出贡献。

水溶性共轭聚合物已广泛用于生物检测与成像。本项目将水溶性共轭聚合物和金属增强荧光相结合，对肿瘤标志物进行高灵敏度检测。主要内容如下：.1、成功完成了Ag@SiO2纳米复合材料的制备及水溶性共轭聚合物的设计、合成。用柠檬酸三钠还原AgNO3的方法制备银胶，改变四乙氧基硅烷的量来控制SiO2壳层的厚度，并用透射电镜和紫外可见吸收光谱对其进行表征。.2、成功合成了芴的聚合物，然后对聚合物进行季胺盐化使之成为阳离子水溶性高分子，通过对高分子进行磺酸盐化得到阴离子水溶性高分子。研究了合成的水溶性共轭聚合物在不同缓冲溶液中的紫外可见吸收光谱和荧光发射光谱，与文献相符。.3、对Ag@SiO2纳米复合微球上单克隆抗体-待测抗原-染料标记抗体的组装条件进行了摸索。首先在Ag@SiO2纳米复合微粒表面引入氨基，然后将待检测肿瘤标志物的单克隆抗体（anti-CEA或anti-AFP）连接在三嗪功能化的二氧化硅表面，优化待测肿瘤标志物单克隆抗体的固定效率使之达到最大。用酪蛋白封闭未连接位点防止其它蛋白的非特异性连接，加入待测抗原，再加入染料（荧光素或Cy3）标记的anti-CEA或anti-AFP，形成“三明治”型的夹心结构。先检测Ag@SiO2纳米复合粒子上染料的金属增强荧光。再加入水溶性共轭聚合物，依靠水溶性共轭聚合物和抗体之间的静电作用检测从高分子到染料的荧光共振能量转移是否发生增强。分别对相应的肿瘤标志物进行定性定量分析，确定该方法的检测限以及线性检测范围。.发表SCI收录论文11篇，在ACS Symposium Series上撰写一个章节，授权专利一项，另外申请的另一项专利正在实质审查中，培养研究生2名，参加国内国际会议3次。另有文章正在整理中。