外泌体调控TLR-8对房颤血栓形成的作用及机制研究

Thrombosis related with atrial fibrillation (AF) is serious, leading to systematic thromboembolism (SE) which can be life threatening. However, it is difficult to overcome high bleeding risk caused by anticoagulation drugs. TLR-8 was suggested to be closely associated with thrombosis and SE. Our previous study found that expression of exosomes increased in atrium of AF and thrombus mice induced by CREM-TG gene transferation, which may be related to increased TLR-8 expression in atrial myocytes through miR-21 transferation by platelet derived exosomes, thus promoting AF related thrombosis. In the current study, we will extract and identify platelet derived exosomes from control and CREM-TG mice, respectively,to evaluate the difference of miR-21 carried by platelet derived exosomes in the two groups. And then the ability of absorbance of platelet derived exosomes labeled using PKH26 fluorescence red by atrial myocytes of the control and CREM-TG mice were detected in vitro. Finally, differences in the expression of PAMPs and HMGB-1 in the atrial myocytes were explored between before and after the use of platelet derived exosomes inhibitor to preliminarily study the mechanism of increased expression of TLR-8 in atrial myocyte regulated by platelet derived exosomes. This study will provide new ideas for preventing AF related thrombosis and SE without bleeding risk.

心房血栓形成与脱落所致栓塞是房颤的严重并发症，可危及生命。现有的抗凝药物疗效有限，且存在高出血风险。TLR-8被认为与房颤血栓形成和栓塞密切相关。前期研究发现，致房颤和心房血栓的CREM-TG转基因小鼠的心房表达外泌体水平升高，可能与血小板衍生外泌体通过传递miR-21转染心房肌细胞TLR-8，从而促发心房血栓形成有关。本课题将分别从对照和CREM-TG小鼠中分离血小板衍生外泌体，并探测其携带miR-21的差异；采用体外实验检测两组小鼠心房肌细胞摄取PKH26荧光红标记的血小板衍生外泌体的能力及表达TLR-8水平的不同；检测抑制摄取外泌体前后两组心房肌细胞表达PAMPs和HMGB-1水平的差异，以初步探讨血小板衍生外泌体调控心房肌细胞表达TLR-8的机制。本研究将为无出血风险的心房血栓和栓塞防治提供新的思路。

在完成伴有血栓和不伴有血栓的房颤的心房标本以及窦性心律的心房标本的采集工作以及血样的采集工作后，我们完成了对这几种疾病的病理组织学的分析，以及相应的血样进行生物信息学分析，建立房颤伴有血栓的基因组学基础以及影响房颤伴有心房血栓形成的高危生物标志物的检测。本课题组采用病毒介导的房颤伴有血栓的模型，提取血液外泌体，探索外泌体介导的前期生信分析得到的基因在心房组织的血栓标志物的表达差异。同时，在我们前期建立的房颤数据库的基础上对房颤血栓的并发症做了创新性的探索，既往的研究多关注左心房的血栓和血栓脱落后所致的体循环栓塞和脑卒中，此次对右心房血栓进行了探索，对其所伴发的肺栓塞进行了关注。发现50岁以下的房颤患者基本上不会发生肺栓塞，而肺栓塞多发生在50岁以上的患者。除此之外，房颤发生的肺栓塞具有性别差异，多发生在女性患者中，发表在Annals of Translational Medicine杂志上（IF：3.932）。完成了对伴有肺部疾病的房颤患者在房颤射频消融术后预测评分的评分预测价值的比较分析，发表在Annal of Palliative Medicine杂志上 （IF：2.595）。关于在房颤伴有心肌梗死患者中血红蛋白的变化对于预后的影响的研究已经顺利发表在Biomarkers杂志上（IF：2.658）。在前期建立的数据库的基础上，探讨房颤患者入院前抗栓对于入院发生心肌梗死的风险以及发生心肌梗死后的预后的影响的研究发表在 Journal of Thrombosis and Thrombolysis 上（已接受）（IF：2.3）。我们还对本中心住院房颤患者的住院病死率进行了探讨，并且探索了影响房颤患者住院病死率的高危因素，文章发表在核心期刊《中国实用内科杂志》上。遵照指南抗栓对房颤和血栓等预后的有益影响的研究发表在核心期刊《内科临床与实践》上。体质指数与心房顺应性的关系的研究发表在核心期刊《中国心血管病杂志》上。以上研究对于房颤的规范抗凝治疗，预测房颤射频消融术的成功，贫血在房颤伴有心肌梗死的死亡预警价值以及房颤发生肺栓塞的警示作用都非常有意义。