自噬在新疆石榴皮鞣花酸肥胖中的作用及作用机制的研究

Obesity associated with many metabolic diseases，caused by excessive adipogenesis due to more intake of energy.Existing anti-obesity agents bear servere side effects. Pomegranate peel extract has good application to regulate metabolism. Ellagic acid is the the most abundant polyphenols in pomegranate peel active substance.Autophagy play a pivotal role in regulation of adipogenesis and obesity. Our previous job show that Ellagic acid reduces adipogenesis through inhibition of expression of protein related to Mitotic Clonal Expansion. Studies show ellagic acid alleviated inflammation and cell proliferation, promote apoptosis in cancer cells. Based on the literature and our previous work, our next work will focus on cell and animals level to investigate (1)the mechanism of ellagic acid and the effect of autophagy in obesity, (2) focus on the intervention of autophagy, SiRNA, Elisa, RT-PCR, westen blotting,etc. were used to investigate the role and mechanism of ellagic acid in obesity intervention. We try to search for targets for anti-obesity agents and new drug development to treat the obesity and its complications.

肥胖伴发诸多代谢性疾病。肥胖由摄取能量过多脂肪形成过度造成。现存的减肥药副作用大，石榴皮多酚有良好的调节代谢的应用前景。石榴皮多酚中鞣花酸含量较高。自噬在调控脂肪的正常生成和更新及维持其正常功能中起着十分重要的作用。我们前期工作表明鞣花酸抑制脂肪形成早期的有丝分裂扩增，抑制细胞周期相关蛋白表达。有文献报导，鞣花酸改善中心性肥胖能减轻体重。基于此我们接下来拟在细胞和动物水平探讨（1）鞣花酸在肥胖中的作用机制及其与自噬的关系；（2）以干预自噬为切入点，在细胞中采用SiRNA，Elisa，RT-PCR，westen blotting 等方法 ，研究鞣花酸对肥胖的干预作用机制，为肥胖及并发症的治疗寻找治疗靶点和新药研发目标。

肥胖对人体健康的影响己成为全世界日益关注的健康问题和社会问题缺乏锻炼。本课题组长期致力于药食兼用植物成分在代谢性疾病中的作用研究。本研究致力于新疆石榴皮多酚鞣花酸对于促进白色脂肪棕色样变影响脂肪积累进而影响肥胖的研究。在前期研究中，在脂肪形成诱导剂作用下，3T3-L1脂肪前体细胞中，鞣花酸可抑制脂肪形成相关分子的表达，从而抑制脂肪的形成。这一发现促使我们设计了此项研究。科学提取新疆石榴皮鞣花酸，进行质量控制，对石榴皮鞣花酸的影响肥胖形成的功效进行进一步研究，分析其可能的作用机制。根据申请内容，我们的研究工作分为三个部分进行，按照申请书内容，本课题组完成了新疆地产药用植物资源石榴皮中多酚类物质的提取分离，建立了石榴皮多酚的纯化工艺，并对其中鞣花酸、安石榴苷两种重要成分进行了定量分析。其次，在3T3-L1脂肪前体细胞水平观察鞣花酸对成脂过程中自噬相关蛋白和基因的影响。最后在整体动物模型上观察了鞣花酸肥胖影响的可能的作用机制。.第一部分工作中，以多酚含量为指标，采用Sephadex LH-20凝胶柱层析法，考察了不同大孔吸附树脂的吸附效果并系统研究了大孔树脂动态吸附性能及洗脱参数，结果显示经处理后的石榴皮多酚含量可达到 76.3%，方法简单易行，所得总酚纯度高，成本低，对工业化生产具有一定的指导意义。同时测得新疆和田地区石榴皮多酚中含有鞣花酸 2.12%，安石榴苷含量为58.5%。活性成分的探讨以及含量测定提供初步研究资料。.第二部分实验，在细胞水平观察鞣花酸对3T3-L1前体脂肪细胞水平对脂肪形成过程中自噬的影响，鞣花酸可改变自噬基因p62的表达，但对LC3Ⅱ， LC3Ⅰ蛋白表达以及LC3Ⅱ/ LC3Ⅰ蛋白水平比值没有影响。用Mito-tracker 染色发现在脂肪分化的终末期（D6-D8），与MDI组相比，EA可增加线粒体数量。.第三部分工作我们用高脂（45%）饲料喂养大鼠24周建立肥胖模型，对动物整体水平观察鞣花酸药效。结果发现，采用不同剂量的鞣花酸在不影响高脂喂养大鼠的食欲的情况下减轻高脂诱导的肥胖大鼠的体重。且鞣花酸不影响自噬相关蛋白表达。而因此后续的整体动物水平实验我们转而观察鞣花酸对白色脂肪组织棕色样变的影响。发现鞣花酸可促进白色脂肪组织棕色样变相关基因表达，这提示鞣花酸可能通过促进白色脂肪组织棕色样变的作用从而起着抑制高脂诱导大鼠体重增加的作用。