调控肝再生磷酸酶-3基因表达的microRNA分子鉴定及其抗胃癌腹膜转移研究

胃癌是我国主要恶性肿瘤之一,死亡率高居首位。腹膜转移是其预后不良的主要原因，当前的抗腹膜转移治疗尚不能获得满意效果。我们在前期研究已找到了肝再生磷酸酶-3（PRL-3）基因表达上调与胃癌腹膜转移密切相关的直接证据，并发现某些microRNA 表达水平在胃癌腹膜转移灶与癌旁粘膜中存在显著差异，而它恰是我们通过生物信息学预测的可能调控PRL-3基因表达的分子。本项目在明确PRL-3基因表达上调与胃癌腹膜转移相关的基础上深入开展机制性研究，拟筛选鉴定出可能靶向作用于PRL-3基因的内源性microRNA分子，试图证明某些特异性的microRNA表达变化可能是胃癌细胞上调PRL-3基因表达的新分子机制，期望找出microRNA分子异常表达的可能机制，并通过体外侵袭模型和动物实验，观察microRNA分子对胃癌细胞侵袭能力和腹膜种植转移能力的影响，探索应用microRNA分子抗胃癌腹膜转移的可能性。

胃癌是我国主要恶性肿瘤之一，死亡率高居首位。肿瘤的腹膜转移是造成患者预后不良的主要原因，而当前的抗胃癌腹膜转移治疗尚不能获得满意效果。在本项目开展前我们发现，肝再生性磷酸酶-3（PRL-3）基因与胃癌腹膜转移密切相关，但其调控机制尚不明确。近来来，小分子RNA（microRNA）通过调控某些基因表达参与肿瘤侵袭转移过程的研究成为热点，同时也为肿瘤的防治提供了新的思路。本项目对PRL-3基因的分子调控机制进行了实验研究，通过生物信息学技术，预测了9条可能调控PRL-3基因表达的microRNA分子，用荧光定量PCR方法在胃癌组织和胃癌细胞系SGC7901、MKN45、MKN28、BGC823及正常胃黏膜组织和胃黏膜上皮细胞系GES-1、HFE-145中检测这9条miRNA分子表达情况，得出两条在胃癌组织及胃癌细胞中表达下调最明显的microRNA分子（miRNA-551a、miRNA-495），并运用质粒转染、荧光定量PCR、Western Blot等生化实验技术，通过细胞体外实验证实了高表达miRNA-551a、miRNA-495能够明显抑制胃癌细胞PRL-3基因mRNA及蛋白的表达水平，降低胃癌细胞的侵袭转移能力，在裸鼠体内实验中发现，高表达miRNA-551a、miRNA-495能够明显抑制胃癌细胞的腹膜转移，延长裸鼠生存期。因此我们提出，在胃癌中，miR-495、miR-551a这两条microRNA分子靶向调控PRL-3基因的表达，抑制胃癌的侵袭转移。这丰富了microRNAs及PRL-3基因的调控机制研究，并为今后运用microRNA分子治疗进展期胃癌提供了有力的理论依据。