基于肝脏转运体研究左金丸中吴茱萸“引药入肝”的作用机制

Medicinal guiding can guide other traditional Chinese medicine to specified entrails or meridian and enhance the therapeutic effect of the prescription. There are significant correlation in guiding action and tissue distribution on account of dose-effect relationship. Evodia rutaecarpa guides other drugs to the liver meridian in Zuojin Pills. Our study indicates that Evodia rutaecarpa can promote the uptake and the concentration of berberine in liver, the mechanism needs further research. Drug transportion mediated by transporters, drug distribution in target tissue is influenced by the regulation of transporters. On these grounds, We put forward the hypothesis that Evodia rutaecarpa raises the distribution of other drugs by the regulation of hepatic transporters to play guiding role. According to the idea that the tissue distribution of drug is influenced by transporters in cells, we will establish the rat model and Sandwich-cultured rat hepatocytes model, with the method of LC-MS/MS, RT-PCR, Western Blot, observe the influence of Evodia rutaecarpa on the tissue distribution and the transport of effective components in Zuojin Pills, and further study the regulation of the activity and expression of Oatp1b2 and P-gp in liver. Our study will be helpful to explore the connotation of medicinal guiding and provide a new idea for the research of medicinal guide theory.

引经药能够引导药物到达特定的脏腑经络，提高方剂疗效。基于药物量效关系，中药引经作用与药物靶向分布具有相关性。吴茱萸在左金丸中有引药入肝的作用，我们的实验提示吴茱萸可促进小檗碱的肝脏摄取，增加肝脏分布，其机制有待进一步研究。已知转运体介导药物的跨膜转运，调控转运体可影响药物组织分布。据此，我们提出假说：吴茱萸可能通过调控肝脏转运体增加肝中药物分布，从而表现引药入肝的引经效应。根据药物组织分布→细胞转运→转运体介导的思路，本研究将通过大鼠体内药动学模型和“三明治”培养肝细胞模型，采用LC-MS/MS、RT-PCR、Western Blot等手段，明确吴茱萸对左金丸主要成分组织分布和细胞转运的影响，探讨吴茱萸对肝脏转运体Oatp1b2和P-gp功能活性及转录表达的调控，揭示吴茱萸引药入肝的作用机制，从药物转运的新视点阐明吴茱萸引经作用的科学内涵，为中药引经理论研究提供新思路。

引经药能够引导药物选择性地分布于特定组织，从而靶向增强疗效。吴茱萸在左金丸中有引药入肝的作用，本项目从药物分布的重要环节—药物转运出发，探讨吴茱萸是否通过调控转运体增加药物在肝组织中的分布，从而发挥引经效应。. 首先运用UPLC-MS/MS分析吴茱萸对左金丸中小檗碱、巴马汀和药根碱大鼠组织分布的影响，结果显示吴茱萸可增加上述3种生物碱在大鼠肝组织中的分布，减少肺中的分布。检测吴茱萸对大鼠肝脏转运体Oatp1b2和P-gp的表达发现吴茱萸可增加大鼠肝脏转运体Oatp1b2的基因及蛋白表达，抑制P-gp的表达。. 通过大鼠原代肝细胞模型，发现小檗碱、巴马汀和药根碱进入肝细胞均以主动转运为主，Oatp1b2参与了其肝脏摄取，3种生物碱均经胆汁外排，P-gp介导了其胆汁外排。吴茱萸、吴茱萸碱和吴茱萸次碱可显著提高小檗碱和巴马汀的摄取，减少小檗碱、药根碱、巴马汀的外排。因此，吴茱萸可能通过影响小檗碱、巴马汀和药根碱在肝细胞中的摄取和外排从而影响在肝组织中的分布，进而发挥引经作用。. 进一步实验发现吴茱萸及其成分吴茱萸碱、吴茱萸次碱对转运体Oatp1b2功能无影响，对P-gp的功能具有抑制作用，吴茱萸、吴茱萸碱和吴茱萸次碱可增加大鼠原代肝细胞的Oatp1b2 的基因和蛋白表达，降低P-gp的基因及蛋白表达，且呈剂量依赖性。调控肝脏转运体的功能和表达，进而影响药物在肝组织的分布可能是吴茱萸引药入肝的作用机制。. 本项目以经典方剂左金丸为载体，基于转运体探讨吴茱萸的引经机制，从药物转运的视点阐明吴茱萸引经作用的科学内涵，为中药引经理论研究提供了示范。