重组草酸脱羧酶和草酸氧化酶治疗高草酸尿症的实验研究

Calcium oxalate stones are the most common composition of urinary stone, hyperoxaluria is one the most important pathogenic factors of calcium oxalate stones. So far there is lack of effective means of prevention for hyperoxaluria, especially for the most common idiopathic hyperoxaluria and primary hyperoxaluria . This study tries to complete gene synthesis of oxalate decarboxylase and oxalate oxidase and expression of oxalate metabolism enzymes by P. Pichia yeast expression vectors,then construct oxalate metabolism enzyme coupling crystal and perfuse it into stomach of idiopathic hyperoxaluria rat model. Construction of type I primary hyperoxaluria mouse model with gene knockout technology, lentiviral vectors with oxalate decarboxylase and oxalate oxidase gene were injected into the portal vein of primary hyperoxaluria mouse model, thus obtain oxalate-degrading function. The study will provides new way for the treatment for hyperoxaluria.

草酸钙结石是最常见的泌尿系结石成分之一，高草酸尿症是草酸钙结石最重要的致病因素。迄今对于高草酸尿症防治尚缺乏有效手段，尤其是最常见的特发性高草酸尿症和症状最严重的原发性高草酸尿症。本研究拟通过人工合成草酸脱羧酶和草酸氧化酶基因并构建毕赤酵母表达载体表达相关草酸代谢酶，并体外实验验证其草酸代谢效果，再通过构建草酸代谢酶交联结晶体并给本实验室已有特发性高草酸尿大鼠灌胃后观察尿草酸水平变化情况。另利用基因敲除技术构建I型原发性高草酸尿小鼠模型，通过门脉注射方式将草酸脱羧酶和草酸氧化酶基因的慢病毒过表达载体转入原发性高草酸尿小鼠肝中，使之获得草酸分解功能。本研究的实施对于高草酸尿症的防治提供了新途径。

草酸钙结石是最常见的泌尿系结石成分之一，高草酸尿症是草酸钙结石最重要的致病因素。迄今对于高草酸尿症防治尚缺乏有效手段，尤其是最常见的特发性高草酸尿症和症状最严重的原发性高草酸尿症。本研究通过人工合成草酸脱羧酶和草酸氧化酶基因并构建毕赤酵母表达载体表达相关草酸代谢酶，用PCR和Westernblot检测目标蛋白酶的表达，提纯蛋白酶后观察其在体外降解草酸效果；构建草酸代谢酶慢病毒过表达载体和基因敲除 AGT 构建原发性高草酸尿小鼠，再通过动物模型验证重组草酸脱羧酶和氧化酶在体内降解草酸的能力，并体外实验验证其草酸代谢效果。我们实验成功的构建了草酸氧化酶和草酸脱羧酶基因毕赤酵母表达载体，并鉴定成功。且两种蛋白酶接种于富含不同浓度的草酸培养基中，离子色谱仪检测发现两种酶在体外均具有显著降解草酸的能力。并成功构建I型原发性高草酸尿症小鼠模型。然后通过门静脉注射和灌胃两种方式给予两种蛋白酶，离子色谱仪检测发现二者同样在体内具有降解草酸的能力。本研究的实验结果对于高草酸尿症的治疗提供了新途径。