Annexin A2与ELMO1相互作用从而调节肝细胞癌趋化运动的相关机制研究

Chemotaxis plays an important role in the process of tumor metastasis. ELMO1 is a key molecular in CXCL12 induced HCC chemotaxis signal pathway. When we used siRNA technology depleted the expression of ELMO1, the chemotaxis ability of the cell was impaired, and the actin polymerization was reduced，but the detail mechanism how ELMO1 regulated cytoskeleton was not clear. We found Annexin A2 was one of ELMO1 binding proteins，which played an important role in regulating cytoskeleton, by mass spectrometry and Co-IP assay. This project based on our previous studies is designed for the following aims: investigate the binding site between Annexin A2 and ELMO1 to verify the interaction between Annexin A2 and ELMO1；Explore the influence of Annexin A2 on CXCL12 induced HCC chemotaxis, to further explore the role of Annexin A2 in regulating cell chemotaxis and migration. It may also suggest a potential target or biomarker for therapy patients with tumor metastasis.

在肿瘤转移过程中趋化运动起着关键作用，申请人博士期间已发表文章表明ELMO1是CXCL12诱导的肿瘤趋化运动信号通路中的关键信号分子，采用siRNA技术降低ELMO1表达后，可以明显抑制CXCL12诱导的趋化运动，细胞骨架肌动蛋白聚合能力明显减弱。但目前关于趋化运动过程中ELMO1调控的下游信号通路具体机制仍需进一步研究，我们前期研究采用质谱以及分析免疫共沉淀的方法均证实Annexin A2是ELMO1的一个结合蛋白，Annexin A2在调节细胞趋化运动中发挥重要作用，本研究将在前期工作基础上进一步阐明Annexin A2与ELMO1的结合位点，明确ELMO1与Annexin A2的相互作用以及调控机制，并明确Annexin A2在CXCL12诱导的肝细胞癌趋化运动中的作用,为筛选治疗肝细胞癌转移提供新的评估指标和靶点，对完善肝细胞癌转移的治疗提供重要线索。

肝细胞癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，多数HCC患者初诊时即为进展期，近年来，肝癌相关死亡仍呈上升趋势。肝癌的高复发转移严重影响肝癌患者的预后。组织侵袭、远处转移或复发是肝癌的特性，是死亡的重要原因。肿瘤转移由于治疗效果差，已经成为致患者死亡的主要原因。因此，探讨肝细胞癌的转移机制，寻找新的抑制其浸润转移的治疗靶点，对于降低肝细胞癌的死亡率，延长患者的寿命，具有十分重要的意义。趋化运动是细胞迁移的形式之一，在肝癌的转移过程中起着关键作用。我们的工作表明Annexin A2是ELMO1的一个结合蛋白， Annexin A2可能作为ELMO1的下游信号，在调节细胞趋化运动中发挥重要作用。因此，本研究阐明ELMO1与Annexin A2的相互作用以及调控机制，为筛选治疗肝细胞癌转移提供新的评估指标和靶点，对完善肝细胞癌转移的治疗提供重要线索。重要结果如下：. Annexin A2在CXCL12诱导的肝细胞癌趋化运动和转移过程中的作用。实验数据表明我们采用siRNA 技术降低HepG2细胞中 Annexin A2蛋白表达后，肝癌细胞HepG2的趋化运动和划痕愈合受到明显抑制；同时，也表明了肝癌细胞HepG2的粘附能力、F-actin聚合能力以及侵袭能力均降低。从而，我们完成了在细胞水平上探讨Annexin A2下调后明显抑制了肝癌细胞的趋化运动、迁移、粘附、侵袭以及F-actin聚合能力。. ELMO1是CXCL12诱导的肿瘤趋化运动信号通路中的关键信号分子。我们运用Mass spectrometry analysis蛋白质谱分析技术及Co-IP免疫共沉淀发现Annexin A2与ELMO1存在相互作用。我们进一步应用免疫荧光技术研究探讨Annexin A2 与 ELMO1 共定位以及 ELMO1 表达降低后对 CXCL12诱导的 Annexin A2 膜转位激活产生了抑制作用。. 通过免疫组化研究技术，我们发现Annexin A2在肝细胞癌中存在高表达；进而我们通过分析未发生转移的肝细胞癌以及转移的肝细胞癌组织，结果表明Annexin A2存在表达差异；从而揭示Annexin A2对于肝细胞癌转移过程中起着非常重要的作用。. 在本课题的资助下，我们发表了5篇英文文章和1篇中文综述，此外1篇英文文章已返修。