从保护心血管角度探究佐木阿汤防治HAPC的作用机理

The high altitude polycythemia (HAPC) is a common altitude sickness.It brings damages to heart, brain, vasculars , other organs, and a series of complications. HAPC causes serious impact on the labor force and affects the western development strategy. There is no effective treatment both internal and abroad. Based on clinical and pre-973Special study, Tibetan medicine Zuomua decoction has a good effect in the prevention and cure of the disease. To reveal the mechanism of action, Wistar rats will be used as experimental animals, HAPC as a model, the general condition and vital signs (respiration, blood pressure, heart rate, etc.), blood, blood of cTnI of CGRP, the RBC membrane contractile protein, myocardial changes in mtDNA repair enzymes as indicators; myocardial morphology observed by light microscopy, the Joint Electron Microscopy mitochondria, intercalated discs; flow cytometry, laser scanning confocal microscopy of α-tubulin and mitochondria; thus adopting Zuomua decoction serum ,undertaking myocardial cells primary culture under hypoxic environment in the plateau ,to observe the pulsation of myocardial cell, trypan blue uptake rate and cTnI activity of CGRP, myocardial Ca2 +, of SOD, MDA, etc. The comprehensive analysis will devote to explore this drug mechanism of action, lay the foundation for further study of its pharmacological effects and extracting the active ingredients, promote the development of Tibetan medicine modernization, ensure the region's economic development.

高原红细胞增多症（HAPC）是常见高原病，多为心、脑、血管等器官损害及系列并发症，严重影响劳动力及西部大开发战略。目前国内外尚无有效的治疗方法。基于临床及973前期专项研究，藏药佐木阿汤在防治该病上有良好疗效。为深入揭示其作用机理，拟采用Wistar大鼠为实验动物，HAPC为模型，以一般状况及生命体征（呼吸、血压、心率等）、血常规、血中cTnI、CGRP、RBC膜收缩蛋白、心肌mtDNA及其修复酶的变化为指标；光镜观察心肌形态，联合电镜观察线粒体、闰盘等；流式细胞仪、激光共聚焦显微镜检测α-微管蛋白和线粒体；进而采用含佐木阿汤血清，在高原缺氧环境下进行心肌细胞原代培养，观测心肌细胞搏动功能、台盼蓝摄取率和cTnI、CGRP活性，心肌细胞钙离子，SOD、MDA等，进行综合分析，共同探索此药的作用机理，为深入研究其药理作用，提取有效成分奠定基础，促进藏医现代化发展，为地区经济发展提供保障。

目的：基于临床及973前期专项研究，藏药佐木阿汤对于防治高原红细胞增多症（HAPC）具有良好的临床疗效，本课题拟从动物实验与细胞实验的角度，深入揭示佐木阿汤防治高原红细胞增多症的作用机理。方法：动物实验采用HAPC的Wistar大鼠模型，随机分为平原对照组、高原对照组、阳性药物组、佐木阿汤组，以佐木阿汤进行药物干预治疗，检测一般状况及生命体征（呼吸、血压、心率等）、血常规、血中cTnI、CGRP、RBC 膜收缩蛋白、心肌mtDNA 及其修复酶的变化等指标；光镜观察心肌形态，联合电镜观察线粒体、闰盘等形态学改变；流式细胞仪、激光共聚焦显微镜检测α-微管蛋白和线粒体等；细胞实验采用大鼠胚胎心肌细胞H9C2缺氧损伤模型，随机分为正常组、模型组、5%、10%、15%佐木阿汤组、依那普利组和生理盐水组，以佐木阿汤含药血清进行干预，应用CCK-8比色法检测细胞存活率，测定培养液中肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）释放量，心肌细胞丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）活性，荧光酶标仪法检测心肌细胞内Ca2+浓度变化，Western Blot法测定心肌细胞中Cx43与p-Cx43表达。结果：综合比较动物实验与细胞实验的实验结果，证明佐木阿汤对于HAPC具有显著疗效，推测与以下几点有关：（1）佐木阿汤可改善HAPC模型大鼠的一般状况、心脏功能和血液循环状况，从宏观上证实佐木阿汤防治HAPC疗效的确切性。（2）佐木阿汤具有改善HAPC模型大鼠的心肌形态、线粒体形态、微管等形态学结构的作用，从细胞水平证实佐木阿汤防治HAPC形态学改善的可视性；（3）佐木阿汤可从细胞间隙连接通讯、钙超载、抗氧化等分子水平机理的角度方面促进心肌细胞的存活，从微观分子水平证实佐木阿汤防治HAPC的科学性。结论：佐木阿汤确实具有改善心脏功能、血液循环、心肌酶、心肌形态等防治HAPC的显著疗效，可通过抑制心肌细胞膜的钙超载，加强细胞间隙连接通讯，减轻心肌细胞膜和细胞功能的受损程度，加强心肌细胞抗氧化和清除氧自由基的能力，促进心肌细胞的存活，从而为临床应用佐木阿汤治疗HAPC提供了一定的实验依据。