小菜蛾颗粒体病毒增效基因片段的定位、克隆和序列分析

采用PxGV-DNA与AcNPV-DNA共转染Sf21细胞，经空斑测定AcNPV游离病毒粒子产量，发现PxGV-DNA可提高AcNPV病毒粒子产量达2-13倍。其结果为开展PxGV增效基因研究提供了重要理论依据。采用SupercosI作载体，Sau3AI部分消化PxGV-DNA，经连接、Dotblot和Southern blot鉴定，获得了50多个含不同大小PxGV-DNA片段克隆。根据已报道的TniGV增效基因的序列，设计该基因两端引物，以TniGV增效基因为模板，通过PCR扩增，电泳得到TniGVVEF产物，再经PGEM-T载体连接筛选，获得TniGVVEF克隆。用Dig标记的TniGVVEF基因作为探针，采用Dotbolt和Southernblot把PxGVVEF定位在BamHI/Sall双酶切约78kb的DNA片段上，回收7.8kb的DNA片段。有待做DNA序列分析。