ECSIT、Syntenin基因在对虾先天免疫与发育信号途径中的作用与功能分析

ECSIT, Sytenin are two cytosolic adaptor moleculars in animal cells. In mammals, it had been proved that ECSIT is essential for Toll-like and BMP signaling pathway by interacted with TRAF6 and Smads respectively. An N-terminal targeting signal directs Ecsit to mitochondria where it participate in the antibacterial responses of mitochondria .Using the PDZ domain and the both terminal domains, syntenin could interacte with numerous proteins resulted in diverse biological functions. There are no report about the detail function of ECSIT and syntenin in invertebrate immunity and development signaling pathway until now. Finding out the proteins that interact with ECSIT and Syntenin by yeast two-hybrid screening combined pull-down experiment,studying their expression patterns and tissue distribution, investigating their function upon development and immunity signal pathway by ways of RNAi and overexpression in shrimp, will give a deep view to two protein's function on the regulation and crosstalk of two important biological process and give ways to solve the problem in shrimp cultivation and disease control.

Ecsit和Syntenin都为动物细胞内的多功能衔接蛋白。在哺乳动物中，Ecsit已被证明分别通过与TRAF6和Smads相互作用参与动物的Toll-like信号途径和BMP信号途径，并且可以通过氨基端的序列定位在线粒体上，参与线粒体的免疫功能。Syntenin通过PDZ结构域或者两端的短肽序列，可以参与细胞内多种生理过程。但在无脊椎动物中，这两种衔接蛋白是否可以参与相应的细胞信号传导过程以及通过何种方式进行还没有研究报道。在对虾中，利用酵母双杂交以及Pull down等方式寻找其它与这两种蛋白有相互作用的蛋白，并且研究它们在对虾中的表达与分布，同时通过在细胞系水平和成体水平利用RNAi和过表达的方法研究两基因在发育与免疫信号途径中的作用与功能，将为揭示两种重要衔接蛋白在无脊椎动物免疫与发育过程中的作用，了解两种重要生理功能不同信号途径之间的协调与串扰方式提供帮助，还可为对虾养殖与生产中

ECSIT和Syntenin都为动物细胞中的衔接蛋白。高等动物中，ECSIT被证明在动物发育过程中有重要作用，Syntenin则通过与其它蛋白相互作用，参与癌症发生等多种生理功能。然而无脊椎动物中还没有关于两种蛋白的功能研究。本研究中，通过转录组测序和基因克隆，获得了对虾中存在的ECSIT，Syntenin、-catenin、crustin、Alf、cactus、dorsal、relish、TLR3、TRAF6等多种基因全长，进行了重组表达载体构建和抗体制备。详细研究了ECSIT，Syntenin蛋白在对虾中的组织分布和在对虾免疫与发育过程中的表达模式。通过利用体内RNAi，过表达和死亡率实验等方法，鉴定了几种蛋白在对虾抗细菌和抗病毒免疫过程中发挥的作用。通过利用信号途径研究的一般方法和Pull-down，Co-IP，CHIP，免疫细胞化学等手段，对ECSIT和Syntenin蛋白所参与的信号途径及在信号途径中的位置、功能和发挥作用的分子机理进行了深入研究。同时，对其它基因如-catenin、 TLR3、TRAF6、cactus、dorsal等在对虾免疫和发育过程中的功能也进行了初步研究。本研究结果形成了对动物免疫与发育信号途径中衔接蛋白功能的深入认识，为了解对虾中的两种信号途径组成与联系，认识衔接蛋白在动物免疫与发育中的功能提供了帮助。