Notch信号通路在慢性束缚介导雌性大鼠脑老化进程中的表观遗传调控机制研究

We found patients with liver-depression were more prone to getting old in our previous study. With the establishment of the new medical model "biological-psycho-social", premature aging problems receive more and more attention. Recent studies have found an important role in the inhibition of the Notch signaling pathway to promote cell aging. Based on the previous work, chronic restraint model will be used and three age group SD female rats will be selected: young, middle and old. Each group will be randomly divided into the model group and the control group(n=12/group) . Real-Time PCR, Western Blot will be used to detect crucial gene expression of the Notch signaling pathway in hippocampal and cerebral cortex tissue. MSP will be used to detect the methylation degree of the corresponding gene whose expression was downregulated. SOD activity, MDA and Hydroxyl radicals will also be determined. The purpose is to explore the relationship of chronic restraint on aging brain of female rat and epigenetic regulation of Notch signaling pathway changes, and further enrich the experimental basis of aging theory induced by emotions.

本课题组前期研究发现围绝经期综合征肝郁患者较健康对照组更容易出现衰老现象。随着生物-心理-社会新医学模式的建立,情志致衰理论逐渐受到重视。现代医学最近研究发现Notch信号通路的抑制对促进细胞老化有重要作用。本研究在前期工作基础上将采用慢性束缚法造肝郁大鼠模型，选择青、中、老三个年龄段的SD雌性大鼠，不同年龄段大鼠再随机分为模型组和对照组各12只，采用Real-Time PCR、Western Blot方法分别检测海马和大脑皮质组织中Notch信号通路关键基因的mRNA和蛋白质的表达，用MSP法检测相应基因启动子甲基化程度，测定SOD活力、MDA和羟自由基含量。旨在探讨"肝郁"对雌性大鼠脑老化的作用与表观调控的Notch信号通路变化的关系，进一步丰富情志致衰理论的实验基础。

中文摘要(对项目的背景、主要研究内容、重要结果、关键数据及其科学意义等做简单概述，1000字以内)：.本项目旨在探讨肝郁对雌性大鼠脑老化的作用及其与表观调控的Notch信号通路变化的关系，进一步丰富“因郁致衰”理论的科学内涵。选择不同年龄段的雌性SD大鼠，采用慢性束缚应激结合孤养法造肝郁大鼠模型，分别检测了Notch信号通路关键基因的表达，用BSP法检测相应基因启动子甲基化程度，测定SOD活力、MDA和羟自由基含量。在造模过程中发现，被公认的21天束缚应激法对青年雌鼠的造模效果不理想，因此增加了不同性别青年SD大鼠及去势大鼠肝郁造模的研究。初步探索了肝郁对不同年龄SD大鼠脑老化进程的影响及Notch信号通路的作用分子机制。.结果：.（1）不同年龄段雌性大鼠肝郁模型评价：慢性束缚应激对不同年龄段的大鼠抗氧化应激能力均有一定的影响，但是随着年龄增长，肝郁对12月龄PPS大鼠机体衰老及脑老化进程的影响最为明显。.（2）不同性别肝郁造模评价：慢性束缚应激结合孤养法能较有效的复制肝郁动物模型，但是对于青年雌性SD大鼠，延长束缚应激时程将会提高模型的成功率。.（3）Notch信号通路的作用：21天束缚应激导致3月龄雄性及12月龄雌性SD大鼠Notch信号通路关键基因出现表达下调趋势，但是青年雌性SD大鼠部分Notch信号通路关键基因的表达却出现增加的现象。.（4）表观遗传之DNA甲基化的作用：海马组织和前额叶皮质的DNA甲基化率均较低，而海马组织部分克隆有出现若干CpG位点的连续甲基化，可能是因为脑组织细胞类型丰富，其甲基化率大大低于肿瘤组织的类似研究，因此难以揭示肝郁导致脑老化过程中甲基化的改变情况。.