杆状病毒-昆虫细胞系统表达VLP和发展诺如病毒ELISA诊断方法

在我国诺如病毒感染常见并有其特殊性，我们课题组前期的研究基础表明我国诺如病毒的主要基因型为GII.3和GII.4。目前国际上诺如病毒的诊断主要依靠PCR方法，尚无可以广泛推广应用的ELISA诊断方法。本课题拟运用前期研究确定的诺如病毒GII.3和GII.4感染粪便标本，通过杆状病毒-昆虫细胞系统，表达针对我国诺如病毒主要基因型的VLPs；进一步采用制备的VLPs分别免疫动物产生多克隆抗体并纯化；进而应用纯化的多克隆抗体发展直接法、间接法、夹心法三种ELISA检测方法，并用RT-PCR对三种方法的效果进行评价。以期建立适合我国诺如病毒感染检测的一种敏感性和特异性较高的ELISA诊断方法，为诺如病毒感染所致急性胃肠炎暴发和婴幼儿急性腹泻粪便标本中病毒的检测提供新的方法，为诺如病毒感染者免疫反应的研究和疫苗的研发奠定前期基础。

本课题运用诺如病毒GⅡ.3 和GⅡ.4 感染粪便标本，通过杆状病毒-昆虫细胞系统，表达针对我国诺如病毒主要基因型的VLPs；进一步采用制备的VLPs 分别免疫动物产生多克隆抗体；进而应用纯化的多克隆抗体发展三种ELISA 检测方法，并用RT-PCR 对三种方法的效果进行评价。基本完成了实验的预期计划，成果：已发表SCI文章1篇，Pubmed收录文章1篇，1篇SCI文章正在送审，此外还有1篇文章正在撰写；培养了1名博士生，2名硕士生。.已发表论文2篇：SCI文章《Genetic Susceptibility to Norovirus GII.3 and GII.4 Infections in Chinese Pediatric Diarrheal Disease》，本研究收集了中国西安124例急性胃肠炎住院患儿的粪便、血清和临床资料，同时收集相应的对照标本，粪便标本经RNA提取应用实时定量RT-PCR检测诺如病毒。结果发现中国儿科腹泻病毒感染中，诺如病毒基因型主要为GII.3和GII.4，并且弱的显性分布不能完全保护儿童不受GII.3和GII.4的感染；Pubmed收录文章《急性腹泻住院婴幼儿轮状病毒和诺如病毒感染的临床研究》，研究通过收集2009年4月至2010年5月间198例<5岁的住院腹泻患儿的粪便标本和临床资料，同时收集53例非腹泻患儿作为对照；采用酶联免疫吸附法 (ELISA) 检测A组HRV，实时定量RT-PCR方法检测NoV，并对阳性标本进行病毒部分测序；对腹泻患儿的腹泻严重程度进行评分比较。结果表明单纯A组HRV感染和单纯NoV感染患儿间的腹泻严重程度评分差异无统计学意义，A组HRV仍然是婴幼儿腹泻中最常见的病原体，而NoV则是第二大病原体，婴幼儿中存在NoV隐性感染。NoV测序分析发现NoV病毒感染的主要基因型是GⅡ.3及GⅡ.4。此课题培养了1名博士生，2名硕士生：博士生蔡惠以优异成绩毕业并留校工作，硕士生程丽在此期间参与并发表论文两篇，目前就读于香港中文大学，硕士生叶尔买克•唐沙哈尔顺利毕业回新疆医院肿瘤科工作。