靶向HPV58嵌合型免疫多肽防治宫颈癌的效能及免疫机制

本项目以高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染与宫颈癌发生密切相关为切入点，针对我国HPV58型感染是继16型之后第二个常见的引起宫颈癌的型别的特点，利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统构建HPV58L1-E7嵌合型病毒样颗粒（cVLPs）,并首次建立了表达HPV58 E6E7抗原的C33A细胞克隆和人免疫重建荷HPV58阳性宫颈癌SCID鼠实验模型，拟分别从体内实验、体外实验和多层面探究HPV58 L1-E7cVLPs 免疫多肽的免疫原性、安全性及其防治宫颈癌的效能及免疫机制。本项目旨在开发研制具有我国自主知识产权的、兼具预防和治疗双重作用的靶向58型HPV 感染的L1-E7 cVLPs嵌合型免疫多肽制剂,并为持续性HPV感染、中晚期的宫颈癌患者和术后复发病人的治疗提供新的思路和研究方向。

本项目以高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染与宫颈癌发生密切相关为切入点，针对我国HPV58型感染是继16型之后第二个常见的引起宫颈癌型别的特点，利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统构建HPV58L1-E7嵌合型病毒样颗粒（cVLPs），并首次建立了表达HPV58E6E7抗原的C33A细胞克隆和人免疫重建荷HPV58阳性宫颈癌SCID鼠实验模型，探究了HPV58L1-E7cVLPs嵌合型免疫多肽制剂的生物学特性、免疫原性、安全性及其防治宫颈癌的效能及免疫机制。通过研究，本项目发现：1、表达HPV58E6E7抗原的C33A细胞和人宫颈癌细胞株CaSKi细胞共培养体系显著促进淋巴细胞细胞的增殖，且在该体系中Th1/Th2平衡倾向Th1，对病毒发挥较强的细胞免疫。2、人外周血淋巴细胞-宫颈癌细胞混合反应体系经HPV58L1-E7(aa50-72/aa4-12)cVLPs嵌合型免疫多肽干预后，其淋巴细胞增值率较293细胞组及野生型细胞组高，且对细胞因子的检测发现这两组嵌合肽均能显著提高HPV58型宫颈癌细胞的细胞免疫反应。随着作用时间的延长，两组嵌合型免疫多肽均能抑制HPV58型肿瘤细胞的增殖，促进HPV58型阳性肿瘤细胞凋亡。3、通过RT-PCR检测嵌合型多肽处理的HPV58型肿瘤细胞和野生型C33A细胞，肿瘤细胞组HPV58E7基因低表达。4、HPV58L1-E7（aa50-72/aa4-12）cVLPs嵌合型免疫多肽可逆转宫颈癌细胞恶性增殖的特征。5、对人免疫重建荷HPV58阳性宫颈癌SCID鼠进行嵌合型免疫多肽干预实验发现，瘤内注射HPV58L1-E7(aa50-72/aa4-12)后，肿瘤生长速度明显减慢，小鼠生存时间显著延长，免疫组化检测发现瘤组织内HPV58E6E7表达显著降低，干预后的小鼠外周血及脾脏细胞免疫水平显著增强。预防性干预显示结果与此相似。以上结果均显示嵌合型免疫多肽对肿瘤恶性特征有显著抑制作用。6、对于HPV58L1-E7(aa50-72/aa4-12)cVLPs嵌合型免疫多肽经不同浓度和给药途径进入体内后的急性毒性反应观察发现，随着治疗剂量的增加，小鼠的死亡率降低，剂量为109PFU时降至最低，再增加剂量时小鼠的死亡率反而升高。慢性毒性实验发现, 慢性阈剂量组小鼠体重减轻情况和食欲情况与其他组相比明显好转,且死亡率显著降低。