RNAi阻断膀胱癌表达IgG抑制肿瘤细胞增殖的作用机制研究

近年来研究发现多种癌细胞（乳腺癌、直肠癌等）可表达IgG，针对IgG mRNA特异的反义寡核苷酸或抗IgG抗体可明显抑制肿瘤细胞生长和促进凋亡，提示肿瘤表达非B细胞来源的IgG可能具有促肿瘤细胞生长效应。本课题拟从mRNA和蛋白质水平观察膀胱癌细胞中IgG的表达；扩增膀胱癌细胞表达IgG VH基因后测序比较其同源性和突变位点；针对VH基因构建的的shRNA，以RNA干扰方法阻断膀胱癌表达IgG，检测其对抑制膀胱癌细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡以及增强化疗药物敏感性的作用，并通过裸鼠动物实验在体内检测其对膀胱癌生长的抑制作用，进一步从Src/MEK/ERK及IP3信号途径阐明肿瘤表达IgG对膀胱癌细胞增殖影响的作用机制。本课题旨在为研究膀胱肿瘤发生发展的生物学行为及以肿瘤细胞表达的IgG分子作为靶点的肿瘤生物治疗提供新的途径。

近年来研究发现多种癌细胞（乳腺癌、直肠癌等）可表达IgG，针对IgG mRNA特异的反义寡核苷酸或抗IgG抗体可明显抑制肿瘤细胞生长和促进凋亡，提示肿瘤表达非B细胞来源的IgG可能具有促肿瘤细胞生长效应。本课题拟检测膀胱尿路上皮细胞癌中IgG1的表达及其生物学效应。本课题利用RT-PCR检测膀胱癌细胞株T24、BIU-87、EJ、5637、J82和阳性对照人淋巴瘤细胞株Raji、IgG1 CH mRNA和RAG-1 mRNA、RAG-2 mRNA的表达，免疫组化和Western blot检测到IgG1蛋白的表达，人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1表达明显减少；免疫荧光结果显示IgG1在膀胱癌细胞T24，EJ,5637胞浆中表达呈强阳性，胞核弱阳性;在SV-HUC-1中阴性表达。确定T24、EJ和5637为 IgG1表达显著的细胞株。扩增膀胱癌细胞表达IgG1 CH基因后测序比较其同源性和突变位点, 测序后发现352bp的T24 PCR产物片段和引用序列相吻合，但1kb的T24 PCR产物片段无法扩增得到。针对IgG1 VH基因序列构建3个特异性的siRNA， western blot显示在用lipo iMAX转染IgG1-261达72小时后对T24细胞中IgG1的表达抑制作用最强。本课题旨在为研究膀胱肿瘤发生发展的生物学行为及以肿瘤细胞表达的IgG分子作为靶点的肿瘤生物治疗提供新的途径。