新发现的人转录因子hBKLF对SHP-1基因的转录调控在维持T细胞沉寂中的作用

T淋巴细胞是人体免疫防御系统的主要成分，其激活和沉寂是肿瘤、自身免疫病、移植物抗宿主病发生的关键原因。一直以来T细胞沉寂被认为是缺乏活化信号的被动状态，近年发现T细胞沉寂是由独特信号通路调控的主动状态，SHP-1是这一通路的关键分子。申请者近年发现了一种可能通过调控SHP-1进而控制T细胞沉寂的候选分子，命名为人转录因子hBKLF。本课题拟用转基因方式改变Jurkat T细胞系hBKLF水平，以T细胞增殖、IL-2水平、细胞表面CD71为指标，观察T细胞沉寂和激活情况，同时检测SHP-1表达的变化。进一步采用报告基因实验、EMSA、ChIP实验，观察hBKLF对SHP-1启动子的调控作用，确定hBKLF的调控靶点，探索hBKLF控制T细胞沉寂程序的机理。此项目将扩展人类"T细胞沉寂通路" 领域的研究，有可能利用人转录因子hBKLF调控T淋巴细胞的功能，发展控制肿瘤和自身免疫病的新途径。

T细胞激活和沉寂是肿瘤、自身免疫病、移植物抗宿主病发生的关键原因。一直以来T细胞沉寂被认为是缺乏活化信号的被动状态，近年发现T细胞沉寂是由独特信号通路调控的主动维持状态。申请人在胎肝cDNA文库中新发现的人源转录因子hBKLF可能是控制T细胞沉寂的重要分子。本项目对它在调节T细胞沉寂中可能具有的功能及机制进行探索。首先采用转基因方式改变Jurkat T细胞系hBKLF水平，以T细胞增殖、细胞表面CD71、CD30、CD69水平为指标，观察T细胞的功能状态；同时检测SHP-1表达水平的变化。进一步采用报告基因实验、EMSA、ChIP实验，观察hBKLF对SHP-1的转录调控作用，并确定hBKLF对SHP-1的调控靶点。试验数据表明，hBKLF过表达后Jurkat T细胞增殖受抑，细胞代谢水平降低，细胞不表达活化标志。说明hBKLF过表达导致Jurkat T细胞出现沉寂状态。hBKLF过表达后Jurkat T细胞中SHP-1 mRNA及蛋白水平下降。EMSA实验表明hBKLF在体外可以与SHP-1启动子核心序列的两个CACCC盒结合。ChIP实验表明hBKLF在Jurkat T细胞内与SHP-1启动子−135bp到+53bp片段结合。报告基因实验表明，hBKLF抑制SHP-1启动子的转录活性，删除或突变启动子核心序列的两个CACCC盒后，转录抑制作用减弱。说明hBKLF通过与SHP-1启动子核心序列的两个CACCC盒结合，抑制SHP-1启动子的转录活性，从而降低SHP-1 的表达。综上，hBKLF虽然维持T细胞沉寂，但可能通过降低SHP-1水平而降低T细胞反应的阈值，使T细胞对微小刺激做出快速反应，从而使T细胞获得“记忆”功能。申请人在以上已获得数据基础上对hBKLF功能提出如下假说：hBKLF可能是T细胞获得记忆功能的重要物质基础，并进行了初步的预实验探索。结果显示：hBKLF过表达可以降低pSHP-1水平，提高pAKT、pERK水平，这与记忆T细胞特征是一致的。今后，申请者拟进一步对hBKLF在T细胞记忆方面的作用及机理进行深入探讨。本项目扩展了T细胞沉寂领域的研究，提出hBKLF可能与T细胞记忆有关，如能验证，这将是对T细胞记忆机制的重要揭示，有望利用hBKLF调控T细胞的功能，发展控制肿瘤、自身免疫病和GVHD的新途径。